DNA过氧化物酶的活性及在生物检测中应用的研究

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DNA是生命体内十分重要的功能大分子,是绝大多数生物物种的遗传信息的载体。DNA具有不同的二级结构,包括三螺旋DNA、G-四链体和i-motif序列等。探讨DNA的结构与功能的关系具有十分重要的意义,可以加深对生命本质的认识以及拓展DNA在各个领域的应用。DNA过氧化物酶是由G-四链体DNA与氯高铁血红素形成的复合物,具有过氧化物酶的活性,能够催化双氧水(H2O2)氧化2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)发生显色反应。本论文研究了DNA过氧化物酶的结构与功能的关系,并设计了一种基于DNA过氧化物酶的检测腺苷的生物传感器。1.通过对DNA过氧化物酶的DNA序列的末端进行突变的策略,利用紫外光谱,圆二色谱等实验手段,本文较系统地研究了DNA过氧化物酶的结构与酶活力的关系。我们发现在DNA过氧化物酶的DNA序列的末端增加核苷dTn会对其酶的活性发生较大的影响。当组装成的DNA过氧化物酶的结构越稳定,越有利于酶与底物(H2O2)间的结合,DNA过氧化物酶表现出的活性就越高,反之则越低。2.进而我们设计了一种基于DNA过氧化物酶的生物传感器,它是以核酸适配子为识别分子,以Fok I限制性内切酶为信号控制器,以DNA过氧化物酶为信号输出装置。该DNA生物传感器具有很好的灵敏度和选择性,只对腺苷有识别作用,且其最低检测下限可达500nM,对于其他核苷则无响应。此生物传感器能通过酶促反应的显色效果实现可视化检测,而无需依赖于仪器。
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