论文部分内容阅读
目的：构建质粒pcDNA3.1-VEGF165b，并鉴定检测基因的表达，探讨其对肺腺癌细胞A549生长的影响.
方法：(1)采用Kpn I及Xba I对pcDNA3.0-VEGF165b/pcDNA3.1质粒进行双酶切，并将VEGF165b小片段连接到酶切后的pcDNA3.1真核表达载体上，构建出pcDNA3.1-VEGF165b质粒。
(2)Lipofectamine 2000 脂质体转染试制用以将VEGF165b质粒转染A549细胞。并分别设置质粒转染组、空载体组、未转染组。
(3)RT-PCR检测转染前后VEGF165b以及VEGF165bmRNA表达水平；Western blot法检测VEGF165b蛋白表达水平。
(4)采用MTT、流式法检测 VEGF165b对A549细胞生长及细胞周期分布的影响。
结果：酶切鉴定结果显示，pcDNA3.1-VEGF165b质粒构建成功；构建出的pcDNA3.1-VEGF165b在A549细胞稳定表达；转染A549细胞后可见VEGF165b在mRNA及蛋白水平显著表达；转染前后VEGF165mRNA表达水平无显著性差异；MTT、流式法检测结果发现VEGF165b转染组的A549细胞周期分布及细胞生长与对照组相比无显著性差异。
结论：成功构建出pcDNA3.1-VEGF165b；转染后VEGF165b可在A549细胞中稳定表达；VEGF165b表达水平增高对VEGF165表达水平无显著性影响；pcDNA3.1-VEGF165b对A549细胞生长为无显著影响。