从化学和生物学两个不同角度对中药化学成分进行系统性认知,对新药的开发和应用具有重要意义。补骨脂化学成分组成极为复杂,开发一种快速、高效的分离制备方法系统性分离制备主要活性单体化合物是当前亟待解决的问题。同时补骨脂药材现有的质量评价只以香豆素中补骨脂素、异补骨脂素的总含量不低于0.7%为标准,指标单一,质量评价标准不够完善,需要建立更加系统、全面的质量评价方法。本课题以补骨脂为研究对象,通过文献调研、液质联用色谱（LC-MS）,结合补骨脂的主要生物活性应用、活性成分和化合物的含量研究结果,确定补骨脂的标志性化学成分;以分离富集模式的反相二维色谱为手段,采用色谱分离专家系统软件XTool对色谱条件进行优化,通过上样量等参数考察和方法学验证,建立了一个系统性分离制备补骨脂中标志性化合物的方法;以分离得到的标志性化合物组成混合对照品,建立基于标志性化学成分的补骨脂药材多指标指纹图谱质量评价方法。具体研究结果如下:1.通过文献调研补骨脂中的化学成分、生物活性、活性成分含量等综合分析,再结合高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）分析和液质联用色谱（LC-MS）鉴定,最终确定补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂定、Corylidin、补骨脂酚、Corylifol A、新补骨脂异黄酮、补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂色烯查耳酮、异补骨脂查耳酮、补骨脂二氢黄酮甲醚和补骨脂查耳酮14种化合物为补骨脂药材中的标志性化学成分。2.以分离富集模式的反相二维色谱为手段,以C18柱（250 mm×30 mm,10μm）作为第一维、第二维的分离柱,乙腈和水作为流动相,C18柱（80 mm×30 mm,10μm）作为富集柱,水为富集稀释液,以XTool色谱专家软件和HPLC预测和优化的一维和二维色谱分离条件梯度洗脱。经考察确定一维色谱分离的上样量为500 mg,一维分离时间为200 min。最终一维分离得到18个可重复获得的组分,二维分离得到17个纯度大于98%的单体化合物,其中包括14个标志性化学成分,并通过质谱和标准品对其进行了结构确认。分别为补骨脂苷（13.11 mg）、补骨脂素（25.71 mg）、异补骨脂素（16.13 mg）、补骨脂定（21.53mg）、Corylidin（11.43 mg）、补骨脂酚（26.70 mg）、Corylifol A（22.74 mg）、新补骨脂异黄酮（26.13 mg）、补骨脂异黄酮（20.72 mg）、补骨脂甲素（8.14 mg）、补骨脂色烯查耳酮（16.12mg）、异补骨脂查耳酮（21.81 mg）、补骨脂二氢黄酮甲醚（22.80 mg）、补骨脂查耳酮（8.70 mg）及3个微量成分Cyclobakuchiol C（10.81 mg）、Astragalin（10.30 mg）、Bakuchalcone（13.80mg）。3.将14个标志性成分组成混合标准品,建立补骨脂药材标志性指纹图谱,并对该方法进行了方法学验证。以标志性成分峰面积和保留时间的RSD为指标,结果显示精密度RSD分别低于1.55和0.65,稳定性RSD分别低于1.78和0.89,重复性RSD分别低于1.78和0.58,结果表明此方法简单、准确、可靠,为补骨脂的质量评价提供了参考。4.收集10个不同地区的补骨脂干燥果实、制备补骨脂提取物,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行评价,结果表明各地区药材相似度大于0.9,共有峰的平均相对保留时间和相对峰面积的RSD结果表明,中药补骨脂品种成分相近,但各成分含量差别比较明显。