果实的发育成熟过程是植物所特有的生命现象,而果实本身也在人类的饮食结构和营养供给中占有举足轻重的地位。因此,这个特殊的生长发育过程一直都倍受关注。近年来,随着分子和遗传学在果实乙烯合成、乙烯响应和转录因子调控等方面研究的不断深入,人们果对实发育,尤其是鲜果的成熟机制有了更深层次的认识。　　 番茄(Solanum lycopersicum)存在有大量与果实成熟相关的突变体,所以一直被认为是果实发育成熟研究的模式植物。作为众多突变体的典型,rin突变存于乙烯调控途径的上游,并且不受乙烯调控。最近,人们通过图位克隆的方法在rin基因位点克隆到了MADS-box类转录因子RIN,随即又在草莓这种研究非呼吸跃变成熟途径的模式植物中发现了其同源基因。由此推测RIN可能是两种不同成熟途径的果实中共存的保守调控因子。本研究通过酵母双杂交系统,筛选与RIN互作的相关蛋白,进行功能分析。不仅可以更好的了解RIN这类转录因子在复杂的成熟调控网络中的作用机制,更可以让其在延长货架和提高果实品质中得到广泛的应用。研究结果如下:　　 1.依据GenBank上的RIN基因信息以及生物信息学分析,通过RT-PCR的方法分别获得了全长及亚克隆片段RIN(MIK、IKC、IK和K)。　　 2.构建了基因完整片段和亚克隆片段的pGBKT7钓饵表达载体,进行自激活和毒性检测后发现,各重组钓饵载体均无自激活性,但pGBKT7-RIN和pGBKT7-IKC则对宿主菌Y187有明显的毒性抑制现象。　　 3.通过半定量RT-PCR的方法对PIN基因在番茄AC(Ailsa Craig)幼果、绿熟、破色、粉红和红熟发育时期果实mRNA水平的表达差异进行分析。结果显示RIN基因在幼果期基本不表达,从绿熟期开始随着果实成熟度的增加表达也随之增加,在红熟期达到最大。　　 4.以破色、粉红和红熟时期果实的mRNA的混合样品为模板,成功分离、纯化了果实成熟期混合的双链cDNA,将其与pGADT7-Rec线性载体共转化酵母宿主菌AH109后,构建了酵母双杂交文库。对文库进行插入片段大小检测,发现片段在500bp到3kb之间,且多态性良好。血球计数法检测文库滴度为1.2×109cells/ml。　　 5.用pGBKT7-MIK重组质粒作为钓饵对文库进行mating,得到了约200个杂交菌斑,结合效率为1.2％。PCR检测后随机选取40个片段进行测序。　　 6.测序得到了31个序列的部分信息,对序列信息在SGN Uni基因数据库进行序列比对后,得到了14个有效的基因信息。随后对其中感兴趣5个基因进行了功能分析:Le01和Le02为MADS-box基因,可能调控果实成熟发育；Le04为己知功能的番茄LeSNF1/AMP活性的蛋白激酶基因,有磷酸化活性；Le05预测足CaM蛋白基因,可能参与信号转导；Le12预测为RING finger(C3HC4-type)保守结构域锌指蛋白,可能参与泛素化过程。