近年来,人类医疗领域所使用的多种抗生素已被广泛应用于农业和畜牧业中。用于食品性动物中作为饲料添加剂的抗生素占全球每年消耗抗生素总量的90%。抗菌药物作为促生长剂的长期及过度使用造成耐药菌大量产生及扩散,使食品安全和人类健康受到了严重威胁。四环素作为一种广谱抗菌药物,由于其高效、低毒、价廉的特点被广泛用于动物及人类临床疾病的治疗和预防用药。同时,四环素作为抗生素通常用在生猪产业,可以治疗疾病、促进猪的生长。这种抗生素选择性压力直接导致了细菌耐药性的产生。由耐药质粒传递产生的耐药性在自然界发生的细菌耐药现象中占有重要地位,也是临床上耐药性迅速变化的主要原因之一。由耐药性质粒介导的耐药菌在世界范围内急剧增加,而且还在朝着介导多重耐药的方向发展。动物源食品中的耐药基因可以通过食物链以直接或间接方式向人类传播。目前针对食物链中耐药基因的分布研究较少。本研究以厦门某屠宰场猪肉中分离到的耐药菌为研究对象,探究其对9种抗生素的耐药情况,以及四环素耐药基因的分布和耐药机制,以期对食物链中四环素耐药基因的分布和扩散提供理论依据。本实验从厦门某屠宰场采集了50份猪肉样品,对猪肉中的耐抗生素细菌进行了分离和16S rRNA基因分子生物学鉴定。共分离到129株菌,属于15个不同的种属,其中革兰氏阴性菌118株(91.5%),革兰氏阳性菌11株(8.5%)。沙雷氏菌、气单胞菌、柠檬酸杆菌、大肠杆菌、不动杆菌的分离率较高,为23.26%-10.85%；其次为香味菌、乳球菌,分离率分别是5.43%、6.20%；而普罗威登斯菌、拉乌尔菌、葡萄球菌、变形杆菌、克雷伯菌、假单胞菌、溶酪大球菌、乳杆菌每种菌的分离率最低,不超过3株。采用K-B法对分离到的菌株进行耐药性检测。耐3种以上抗生素的菌株有116株,占89.92%,其中耐3种、4种抗生素的相对较多分别有33、53株,其次为耐5种、6种抗生素分别有13、13株,耐7种、8种抗生素的有3株和1株。分离菌株对9种抗生素有不同程度的耐药性,耐青霉素和万古霉素的菌株相对较多,分别占97.67%和89.92%；其次是耐红霉素、四环素和复方新诺明的细菌,分别占到72.93%、68.22%和27.91%；耐庆大霉素、氯霉素、头孢噻肟和环丙沙星的菌株最少,不超过20%。利用PCR扩增技术对耐四环素的菌株进行了15种四环素耐药基因的检测,包括7个外排泵基因(tetA, tetC, tetE, tetG, tetK, tetL, tetA/P),7个核糖体保护基因(tetM, tetO, tetQ, tetS, tetW, tetT, tetB/P),1个钝化酶基因(tetX)。结果表明,外排泵基因多于核糖体保护基因,且外排泵基因多存在于革兰氏阴性菌中,而核糖体保护基因多存在于革兰氏阳性菌中,外排泵机制在四环素耐药中起更大的作用。采用SDS-高温高浓度双重处理交替培养法来对5株大肠杆菌的质粒进行消除,通过药敏实验观察耐药谱的变化、PCR扩增耐药基因、消除前后质粒图谱对比发现,一株大肠杆菌的tet耐药基因存在于质粒上,有菌株间传播的可能。