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背景:CD82/KAI1是特异性肿瘤转移抑制基因,属于四跨膜蛋白超家族(TM4SF),通过调控细胞与细胞、细胞与细胞外基质的信号转导,对多种肿瘤细胞的侵袭转移具有抑制作用,CD82/KAI1广泛表达于生殖、血液和神经等系统。胚胎成功着床涉及子宫和囊胚之间复杂的信息交流,卵巢激素激活囊胚获得着床能力,同时子宫在雌孕激素作用下协同进入“植入窗口期”。囊胚被激活后对子宫内膜腔上皮细胞进行黏附、侵袭,随后着床点附近的子宫基质细胞开始广泛地发生增殖和分化,伴随蜕膜区血管的大量增生,子宫充血水肿且重量迅速地增加,最终胚泡完全进入子宫系膜对侧的基质,这段时间子宫内膜的变化称为子宫基质细胞蜕膜化。子宫蜕膜细胞在母胎对话中扮演着多种角色,如营养供给、免疫保护和调控胚胎滋养层细胞侵袭等。课题组前期实验结果表明:CD82/KAI1在妊娠早期小鼠子宫中呈现规律表达,对母-胎界面滋养层细胞的浸润具有抑制功能,因此推测, CD82/KAI1在胚胎植入时蜕膜化进程中具有一定的功能。 目的:以妊娠 D1-8小鼠为研究对象,从在体和离体两方面研究CD82/KAI1在小鼠子宫内膜化过程中表达规律及作用机制。 方法:1.取妊娠小鼠D1-8子宫组织,Western blotting、原位杂交和免疫荧光技术观察CD82/KAI1 mRNA及蛋白的表达规律;2.建立体内诱导子宫内膜蜕膜化小鼠模型,利用免疫荧光技术观察D5-D8小鼠子宫中CD82/KAI1蛋白表达变化;3.体外诱导小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化,过表达或干扰CD82/KAI1蛋白表达,Western Blotting检测诱导72h时蜕膜细胞中Cyclin D3、PR以及CD82/KAI1的蛋白表达变化。 结果:1.Western Blotting结果显示,CD82/KAI1蛋白表达于妊娠小鼠 D1-D6子宫,原位杂交和免疫荧光结果表明, D1时, CD82/KAI1mRNA表达在子宫内膜腔上皮细胞,D4时,CD82/KAI1表达在子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞,D5开始,CD82/KAI1mRNA和蛋白表达在初级蜕膜区,D6时,CD82/KAI1蛋白仍主要表达在初级蜕膜区,和D5相比,表达范围扩大,D8时, CD82/KAI1mRNA和蛋白主要表达在次级蜕膜区;2.体内人工诱导子宫内膜蜕膜化模型的免疫荧光结果显示:D5时,CD82/KAI1在腺上皮细胞中有少量表达,而腔上皮细胞无表达,D6-D8依次在初级蜕膜区和次级蜕膜区表达,表达模式和在正常妊娠小鼠子宫中表达模式相似,但比正常妊娠小鼠子宫的表达水平稍低;(3)Western Blotting检测结果显示:体外诱导小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化,蜕膜化标志分子Cyclin D3、PR在体外培养24h、48h均显著增加,CD82/KAI1在体外培养24h、48h显著增加,过表达CD82/KAI1后,能显著提高诱导72h时蜕膜细胞中的Cyclin D3蛋白表达水平,下调CD82/KAI1表达后,Cyclin D3、PR表达水平不受影响。 结论:CD82/KAI1参与调节胚胎植入后子宫内膜基质细胞蜕膜化进程。