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毒死蜱作为一种广谱、低毒、低残留、低抗药性和高效的有机磷杀虫剂,在我国被广泛应用,同时其在环境中的污染不容忽视。生物修复是治理毒死蜱污染的一种切实有效的方法。本实验室分离到一株以毒死蜱为唯一碳源和能源生长的细菌DSP,通过形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析将其鉴定为芽孢杆菌(Bacillus latersporus),并确定了其降解功能位于质粒pDOC。本文通过投加质粒pDOC到土壤进行生物修复,探索质粒pDOC在土壤中的转移机制及其在毒死蜱降解中的作用,以建立一种以质粒转移为基础的农药微生物降解生物强化新途径,从本质上提高土壤微生物对农药的降解能力,克服生物强化中面临的接种菌存活问题。主要研究结果如下：(1)利用菌株Bacillus latersporus DSP、E. coli DH5a (pZP201-gfp)及E. coli HB101(pRK2013)的抗性交叉差异行为进行三亲杂交构建荧光毒死蜱降解菌Bacillus latersporus DSP (pDOC-gfp)。通过荧光、降解功能及降解性质粒pDOC-gfp检测证明Bacillus latersporus DSP (pDOC-gfp)构建成功。(2)以杭州华家池桑树田土壤为材料,采用标记质粒pDOC-gfp投加到毒死蜱污染土壤进行生物修复,并从修复30d后的土壤中分离得到4个发荧光且对毒死蜱有降解能力的单菌,分别命名为ZQ1、ZQ2、ZQ3和ZQ4。通过形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列证明这4个菌株属于不同种的细菌,由此说明质粒pDOC-gfp在土壤中向土著微生物发生转移。(3)利用标记菌株Bacillus latersporus DSP (pDOC-gfp)研究了质粒pDOC强化十壤中毒死蜱降解作用的持久性及其对土壤微生物的影响。结果表明,随着施药频率的增加,降解菌对毒死蜱的生物强化效果长期有效；接种降解菌对土壤微生物群落功能多样性没有显著影响,不具破坏性。(4)利用标记菌株Bacillus latersporus DSP (pDOC-gfp)采用土柱淋滤的方法研究质粒pDOC在饱和流/非饱和流毒死蜱污染土壤中垂直迁移情况及其对毒死蜱降解。研究发现,质粒pDOC在土壤中可以向下发生迁移；同时质粒供体菌的迁移与质粒转移进入土著菌可以强化土壤中毒死蜱的降解作用。(5)研究质粒pDOC强化毒死蜱微生物降解的影响因子,结果表明：接种质粒供体菌明显促进了毒死蜱生物降解率,E. coli JM109(pDOC-gfp)是本实验条件中长期修复毒死蜱污染土壤的最佳选择；不同条件下E. coli JM109(pDOC-gfp)对毒死蜱的降解作用顺序为：10mg kg-1≈1mg kg-1>50mg kg-1>100mg kg-130℃>40℃>20℃、60%WHC (田间最大持水量)>40%WHC>80%HZ soil(杭州土壤)>JX soil (嘉兴土壤)>XS soil (萧山土壤)>JH soil(金华土壤)。