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、研究采用超声波、SDS沸水浴、溶菌酶、细胞裂解液四种细胞破碎方法提取酸土脂环酸芽孢杆菌可溶性全细胞蛋白,电镜观察细胞破碎程度,并进行SDS-PAGE电泳分析,优选出提取可溶性全细胞蛋白的最佳方法;通过单因素试验和Box-behnken试验设计确定细胞裂解液处理的最佳工艺参数;验证了 SDS-PAGE电泳的重复性,并采用可溶性全细胞蛋白的SDS-PAGE图谱来进行脂环酸芽孢杆菌的快速鉴定;找出了 API-50CH试剂盒颜色反应不明显的原因,并对API-50CH的方法进行改进,得到标准菌株的糖酵解反应图谱,并将其用于脂环酸芽孢杆菌的快速鉴定。获得的主要结论如下:1、系统考察了超声波法、SDS沸水浴、溶菌酶及细胞裂解液处理对A.acidoterrestris DSM3922T细胞破碎和可溶性蛋白提取量的影响,结果表明,细胞裂解液处理提取可溶性全细胞蛋白的效果最好。不同破碎方法对蛋白图谱的影响较大,细胞裂解液处理的蛋白条带背景比较清晰,谱带数最多,采用细胞裂解液处理提取酸土脂环酸芽孢杆菌中的可溶性全细胞蛋白最为可行。2、Box-behnken试验设计和响应面分析结果显示,细胞裂解液处理提取A.acidoterrestris DSM3922T可溶性全细胞蛋白的最佳工艺条件为:处理时间37.4 min、处理温度18.9℃、料液比27.0 ml/g。在最佳提取工艺下,可溶性全细胞蛋白提取量能达到 161.18 mg/g。3、比较了各种培养条件对电泳图谱的影响,结果表明,培养时间、培养基和培养温度等条件对电泳图谱没有影响。同一菌株不同批次和同一样品不同次的电泳图谱一致或有轻微差异,而不同的破碎方法对电泳图谱的影响较大。4、20株嗜酸耐热菌的全细胞蛋白SDS-PAGE电泳图谱存在着不同程度的差异,此法能将嗜酸耐热菌区分开来,且与16S rDNA序列测序后的分析结果基本相符,明了该方法对枯草芽孢杆菌和脂环酸芽孢杆菌的区分可行。5、API-50CHB不能用于脂环酸芽孢杆菌的鉴定与指示剂无关,但与菌体糖酵解代谢产生酸的量有关,产生的酸的量较少,达不到指示剂发生变化的阈值。而使用将接种物浓度翻倍的方法,可以使脂环酸芽孢杆菌API-50CH试剂盒颜色反应更加明显。6、通过改进试剂盒的使用方法,使得脂环酸芽孢杆菌糖酵解反应明显,得到了标准菌株的基于API-50CH的编码。运用糖酵解反应谱鉴定Alicyclobacillus的结果表明,12株Alicyclobacillus和8株B.subtilis的糖酵解谱具有明显的差异。同时,聚类分析结果表明此法能很好的将Alicyclobacillus与B.subtilis区分开来,并且A.acidoterrestris的糖酵解编码基本完全一致。