木霉病害菌对柞水黑木耳生长影响及防治

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本论文以柞水黑木耳种植中最主要病害菌木霉控制为目标,进行了木霉病害菌的分离鉴定、生物学特性研究、致病机制的初探、生物防治菌的筛选及其作用机理等研究,获得如下结论:从木霉污染的黑木耳袋料菌棒中共分离纯化得到3株木霉菌,编号分别为KQQ-3、KQQ-4和KQQ-7。根据形态特征和ITS序列分析,鉴定3株木霉均为侧耳木霉,是同种木霉的不同菌株。侧耳木霉的培养特征为:菌丝呈白色,生长速度为1.11~1.95 cm/d,菌落呈圆形,培养3~4 d时产生绿色孢子,分生孢子梗呈树枝状,分枝繁复,初级分支较长,次级分支较短且顶部着生孢子,分生孢子呈中心向内凹陷的卵圆形。3株侧耳木霉在不同碳源、氮源培养基上的菌丝生长和产孢能力存在明显差异,适宜菌丝生长和适宜产生孢子所需的碳源、氮源不尽完全相同。KQQ-3、KQQ-4和KQQ-7菌丝生长的适宜碳源分别为果糖、乳糖、甘露醇;适宜产孢的碳源分别为葡萄糖、甘露醇、果糖;适宜菌丝生长的氮源分别为甘氨酸、牛肉粉、硫酸铵;适宜产孢的氮源分别为蛋白胨、牛肉粉、酵母膏。侧耳木霉培养时,当温度为25~30℃、p H为6~7、栽培料含水量为75%~85%、持续黑暗培养时,菌丝生长速度较快,为1.09~2.11 cm/d,产孢数量多,产孢对数值为8.64~9.54。侧耳木霉对黑木耳菌丝和子实体影响是竞争和侵染的关系。平板试验时,将侧耳木霉和黑木耳菌碟分别接种至黑木耳生长培养基上,前者菌丝生长速度是后者的2.05~3.85倍;两者对峙培养时,侧耳木霉的菌丝和孢子会在黑木耳菌落上继续生长,致使黑木耳菌丝变细、断裂、溶解,最终死亡。黑木耳菌棒试验时,将侧耳木霉和黑木耳分别接种于袋料栽培生产黑木耳的菌棒上,前者菌丝生长速度是后者的2.63~3.38倍;将侧耳木霉接种于正常生长黑木耳菌丝的菌棒上,其能够快速生长,约15 d长满菌棒,黑木耳菌丝由洁白色转为深褐色,逐渐枯萎死亡;将侧耳木霉接种于正常生长黑木耳子实体的菌棒上,其菌丝和孢子可以在子实体上生长,致使子实体萎缩,停止生长,最终流耳,侧耳木霉约15 d长满菌棒,致使菌棒腐烂松软,有明显霉味。本论文分析了侧耳木霉释放的挥发性和非挥发性代谢物对黑木耳菌丝生长的影响。研究表明,侧耳木霉产生的挥发性和非挥发性成分可以抑制黑木耳黑威15和黑29的菌丝生长,非挥发性代谢物的抑制作用较挥发性代谢物强;不同黑木耳品种对侧耳木霉代谢物的抗性不尽相同。利用GC-IMS、LC-MS/MS分析3株侧耳木霉的挥发性、非挥发性代谢物,结果表明KQQ-3和KQQ-7产生的挥发性、非挥发性代谢谱接近,但KQQ-4产生的代谢谱与前两者差异较大。侧耳木霉产生的主要代谢物酯类、酮类挥发性有机物、氨基酸及其衍生物等具有抗真菌活性,可能会抑制黑木耳菌丝生长。平板试验研究表明,高效绿霉净、咪鲜胺锰盐、多菌灵和代森锰锌4种抑菌剂可以有效抑制侧耳木霉菌丝生长。侧耳木霉对不同抑菌剂的敏感性不同,对高效绿霉净和咪鲜胺锰盐较敏感,EC50值为0.1324~0.2103 mg/L;其次是多菌灵,EC50值为0.3196~0.5103 mg/L;对代森锰锌的敏感性最弱,EC50值为3.9292~8.0005 mg/L。选用4株生物防治菌进行侧耳木霉生长抑制试验,结果表明解淀粉芽孢杆菌对侧耳木霉的抑制率最大,对黑木耳菌丝的抑制作用较弱,用80%(NH4)2SO4饱和度提取该菌株代谢液中的蛋白质,发现蛋白质对侧耳木霉有很好的抑制作用。初步推断解淀粉芽孢杆菌对侧耳木霉的抑制是通过代谢液中分泌蛋白作用。
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