【摘 要】
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目的:探索高氧对LPS刺激肺泡上皮细胞损伤的影响,以及铁死亡在高氧加重LPS刺激肺泡上皮细胞损伤中的作用及调控机制。方法:1.使用LPS和细胞高氧装置刺激A549构建脓毒症肺损伤（ALI）不同高氧治疗时间体外模型,A549分别予以LPS,LPS+O4h,LPS+O8h,LPS+O12h,O16h,LPS+O16h处理,通过q RT-PCR检测炎症细胞因子IL-18和IL-1β、铁死亡标志物ACSL
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目的:探索高氧对LPS刺激肺泡上皮细胞损伤的影响,以及铁死亡在高氧加重LPS刺激肺泡上皮细胞损伤中的作用及调控机制。方法:1.使用LPS和细胞高氧装置刺激A549构建脓毒症肺损伤（ALI）不同高氧治疗时间体外模型,A549分别予以LPS,LPS+O4h,LPS+O8h,LPS+O12h,O16h,LPS+O16h处理,通过q RT-PCR检测炎症细胞因子IL-18和IL-1β、铁死亡标志物ACSL4和GPX4的m RNA表达水平;使用Western Blot检测ACSL4和GPX4的蛋白表达情况。2.联合使用Ferrostatin-1（Fer-1）,给予A549 LPS+O16h、LPS+O16h+Fer-1处理,通过酶联免疫吸附测定（ELISA）检测GSH和MDA水平;采用荧光显微镜观察活性氧（ROS）生成情况;通过q RT-PCR检测炎症细胞因子IL-18和IL-1β、铁死亡标志物ACSL4和GPX4的m RNA表达水平;采用Western Blot检测ACSL4和GPX4的蛋白表达情况。3.通过生信分析筛选得到脓毒症ALI时表达下调的铁死亡分子PEBP1,分别予A549 LPS、LPS+O16h、LPS+O16h+Fer-1处理,通过q RT-PCR和Western Blot检测PEBP1表达情况;4.转染PEBP1的si RNA至A549内,予A549 LPS+O16h、NC-LPS+O16h、si-PEBP1-LPS+O16h刺激,通过ELISA检测MDA和GSH水平;采用荧光显微镜观察ROS生成情况;通过q RT-PCR检测炎症细胞因子IL-18和IL-1β、铁死亡标志物ACSL4和GPX4的m RNA表达水平;使用Western Blot检测ACSL4和GPX4的蛋白表达情况。结果:1.与CON组相比,LPS组A549炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达水平上调（P＜0.01）。与LPS组相比,LPS+O4h组和LPS+O8h组A549炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达水平下调（P＜0.05）,LPS+O12h组和LPS+O16h组A549炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达水平上调（P＜0.05）。2.与CON组相比,LPS+O16h组A549内GPX4的m RNA和蛋白表达水平、GSH水平下调,ACSL4的m RNA和蛋白表达水平、MDA水平上调（P＜0.05）。与LPS+O16h组相比,LPS+O16h+Fer-1组A549炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达水平下降,GPX4的m RNA和蛋白表达水平、GSH水平上调,ACSL4的m RNA和蛋白表达水平、MDA水平下调（P＜0.05）。荧光显微镜下见LPS+O16h组A549的ROS生成较CON组显著增多,LPS+O16h+Fer-1组ROS水平较LPS+O16h组显著减少。3.与CON组相比,LPS组A549内PEBP1的m RNA和蛋白表达水平均下调（P＜0.05）,LPS+O16h组A549内PEBP1的m RNA和蛋白表达水平均上调（P＜0.001）。与LPS+O16h组相比,LPS+O16h+Fer-1组A549内PEBP1的m RNA和蛋白表达水平均下调（P＜0.001）。4.与NC-LPS+O16h组相比,si-PEBP1-LPS+O16h组A549内炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达水平下调（P＜0.05）,GPX4的m RNA和蛋白表达水平、GSH水平上调,ACSL4的m RNA和蛋白表达水平、MDA水平下调（P＜0.05）。荧光显微镜下见si-PEBP1-LPS+O16h组A549的ROS较NCLPS+O16h组显著减少。结论:高氧通过铁死亡加重LPS刺激的肺泡上皮细胞损伤,沉默PEBP1抑制铁死亡减轻高氧加重LPS刺激肺泡上皮细胞损伤。
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