本试验用纯化的猪瘟病毒(CSFV)加入等体积的弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂,分别制成完全佐剂抗原和不完全佐剂抗原,免疫8周龄BALB/c小鼠。五免过后,腹腔超强免疫一次,取小鼠的脾细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合。经自行建立的间接ELISA方法筛选和3次亚克隆,最终获得了5株稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株,依次命名为C7、C9、G9、G10、4E8。经鉴定,5株抗猪瘟病毒单抗杂交瘤细胞培养上清ELISA效价为1:1600~1:3200,小鼠腹水单抗ELISA效价为1:51200~1:102400。稳定性试验表明,经过连续传代30代和三次冻存复苏后,部分杂交瘤细胞抗体分泌能力有轻微下降,但分泌能力并没有消失,但仍能稳定分泌特异性抗体。对筛选的阳性克隆进行特异性鉴定。交叉反应性试验结果表明,制备的抗猪瘟病毒单克隆抗体C7、C9、G9、G10及4E8与CSFV均呈阳性反应,而与FMDV、PRV、PRRSV、PCV2、PPV均不反应,表明所制备的单抗与其它抗原无交叉反应性;特异性抗原阻断试验结果表明,CSFV能特异地阻断杂交瘤细胞上清,竞争抑制率最高可达94.30%,而用FMDV抗原和阴性血清代替阻断试验中的CSFV,阻断前后的OD值没有明显的变化,表明制备的单克隆抗体对猪瘟病毒具有较好的特异性。建立了检测猪源抗CSFV抗体间接ELISA方法,最终确定了间接ELISA的最佳工作条件:包被抗原量为9.279μg/mL,包被液为CBS(PH9.6、0.05M),包被时间为37℃1h再4℃过夜,封闭物为0.5%的明胶,酶标二抗做1:2000稀释。利用C7腹水单抗建立了检测CSFV的抗原捕获单抗介导双夹心间接ELISA (AC ELISA)方法。最终确定了猪源抗CSFV高免血清的最佳包被稀释度为1:320,腹水单抗的最佳稀释度为1:1600。经鉴定,该方法对CSFV的检测灵敏度为927.88ng/mL,且具有良好的稳定性。利用制备的抗猪瘟病毒单克隆抗体建立了检测猪瘟病毒抗原的间接免疫荧光检测方法。确定抗猪瘟病毒单克隆抗体和荧光抗体的最适工作浓度分别为1:1000和1:50;交叉反应和抑制试验表明该方法具有较高的特异性。建立的间接免疫荧光检测方法简单可行、敏感特异、结果易于判断,为快速、敏感地检测临床标本中的CSFV提供了一种重要的检测手段。抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及相关检测方法的初步建立,为快速、敏感、准确检测临床标本中的猪瘟病毒及其抗体提供了重要的检测手段,同时也为进一步研究猪瘟病毒的生物学特性及研制猪瘟相关诊断试剂盒奠定了基础。