大白菜作为我国主要的蔬菜作物,每年需求量较高,但根肿病的发生导致其产量急剧下降。本课题组前期通过转录组分析得到一个被根肿菌侵染后在根部显著上调表达的基因BrRGF6。本研究将大白菜抗/感品种作为实验材料,实时荧光定量（RT-q PCR）和组织原位杂交技术对BrRGF6基因的表达模式进行了验证和分析;对拟南芥RGF6基因缺失突变体进行了根肿病抗性鉴定;通过蛋白融合GFP亚细胞定位技术确定BrRGF6蛋白在植物细胞内具体表达位置;并利用酵母双杂交技术筛选出与BrRGF6蛋白互作的蛋白。结果如下:1.首先克隆了候选基因的全长c DNA,鉴定为根分生组织生长因子（Root Meristem Growth Factor,RGF6）,故将其命名为BrRGF6。蛋白结构预测发现BrRGF6蛋白在1-19的氨基酸位点含有信号肽,无跨膜结构,无保守结构域。购买拟南芥同源突变体（rgf6）,对突变体rgf6与野生型进行根肿病抗性鉴定,每12 h进行显微镜观察,发现RGF6基因缺失突变体中发病进程延缓,即野生型拟南芥接种根肿菌后36 h被侵染,而突变体rgf6在根肿菌接种后60 h方被侵染。2.对不同侵染时期感病材料“742”根部进行扫描电镜观察,发现根肿菌入侵时,休眠孢子首先从根皮层开始侵染,随着病情加重,休眠孢子会附着在下胚轴、根皮层及中柱附近,且会改变皮层组织结构。RT-q PCR分析发现BrRGF6基因在大白菜根部的表达量较茎、叶中相对较高。分析BrRGF6基因在根肿菌接种后的大白菜抗/感材料不同时期的表达模式,发现在感病材料中BrRGF6的表达量随着发病程度的加重而显著上调表达,在发病期的上调幅度更大,而在抗病材料中BrRGF6的表达量受根肿菌侵染的影响较小。推测BrRGF6可能在大白菜根肿病发病进程中起作用。3.原位杂交结果显示未接菌处理的大白菜根、茎、叶中均未发现杂交信号,表明BrRGF6基因在大白菜中各部位的基础表达较低。根肿菌侵染后在感病材料中出现了蓝色信号,且发病期的信号明显高于侵染初期。进一步证明BrRGF6基因的表达量随着发病程度的加重而升高,进一步证明其可能在响应根肿菌侵染进程中有一定作用。4.构建BrRGF6基因与GFP融合的基因表达载体BrRGF6-p BWA（V）BSGFP,在烟草中瞬时表达,经DAIP染料染色,用激光共聚焦显微镜检测BrRGF6翻译产物的荧光定位。结果发现,含有候选基因的重组质粒在细胞核上出现荧光信号表达。鉴于此推断BrRGF6定位在细胞核上。5.本实验构建了pGBKT7-BrRGF6诱饵载体,进一步从文库中筛选出BrRGF6的互作蛋白。得到5种互作蛋白,分别为核转录因子Y亚基类,N-（5’-磷酸核糖基）邻氨基苯甲酸异构酶类,异柠檬酸脱氢酶[NAD]催化亚基类,苏氨酸合酶类,60S核糖体蛋白L22-2。其中核转录因子Y亚基类达到19次重复检出率,表明核转录因子Y亚基类在BrRGF6的调控机制中起重要作用。回转验证了BrRGF6与核转录因子Y亚基类互作。6.抗/感材料中BrRGF6启动子序列比对发现,在起始密码子ATG上游100bp区域内有一段间断性差异。该区域内有一个MYB转录因子结合位点。全长启动子区域含有MYB、CAATT-box等转录因子元件。综上所述,BrRGF6基因在大白菜响应根肿菌侵染进程中起作用,核转录因子Y亚基类可能与BrRGF6的调控作用有关,也可能上游受其它转录因子的调控,有待进一步研究。