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OLC1 (overexpressed in lung cancer)是一个潜在的原癌基因,在人肺癌和食管鳞癌中均发现有异常高表达。已有报道证实OLC1(又名Ist1)在有丝分裂的最后一步胞质分裂中发挥了重要作用。本室前期研究工作提示OLC1可能是通过泛素-蛋白酶体途径降解的。在本文第一部分的研究中,我们首先采用血清饥饿、Nocodazole处理的方式将细胞同步化并释放24h,经Western Blot检测后第一次证明了OLC1的蛋白表达具有细胞周期依赖性。随后,使用蛋白合成抑制剂CHX处理细胞,研究结果表明OLC1是一个短效蛋白。再加入蛋白酶体抑制剂MG132与CHX共同处理细胞,并检测了OLC1与泛素之间的相互作用,结果证实OLC1是通过泛素-蛋白酶体途径降解的。我们将OLC1蛋白的序列经BLAST后在其第12-20位氨基酸处发现了一个破坏框结构域Destruction Box,而该D-box恰好是后期促进复合体APC/C (Anaphase Promoting Complex/Cyclosome)特异性识别的结构域。为了证实介导OLC1降解的泛素连接酶E3就是APC/C,我们使用IP实验来检测OLC1与APC/C的亚基APC2之间是否存在相互作用,得到了阳性结果。此外,通过转染表达质粒或者siRNA敲降技术来上调/下调与APC/C关系紧密的共激活因子Cdc20/Cdhl的蛋白水平后,发现Cdc20/Cdhl可以加快OLC1的降解。最后,我们还构建了D-box序列突变的OLC1质粒来研究其降解机制,研究发现降解结构域突变体可以大大增强OLC1蛋白的稳定性,并且转染该质粒后可以引起细胞生长速度加快、克隆形成能力增强。在本文第二部分的研究中,我们通过组织芯片、免疫化学方法检测211例手术切除的人食管鳞癌(ESCC)术后标本中β-catenin的表达情况。研究发现,β-catenin在人食管鳞癌组织中以细胞浆定位为主,其表达阳性率(64.5%)要明显高于癌旁正常组织(5.7%,P<0.05)。同时,应用χ2检验分析了β-catenin的表达与临床病理特征间的相关性,应用Kaplan-Meier生存分析发现β-catenin高表达的食管鳞癌病人预后较差(P=0.010),接下来通过Cox多因素分析证实β-catenin是食管鳞癌病人的一个独立的预后因素(P=0.026)。综上所述,第一部分的研究证实了OLC1的蛋白表达具有细胞周期依赖性,OLC1是通过APC/C介导的泛素-蛋白酶体途径降解的。另外,第二部分的研究证实β-catenin的过表达与食管鳞癌病人的不良预后显著相关,暗示β-catenin是食管鳞癌非常重要的预后因素之一。