【摘 要】
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目的:探讨血管紧张素II(Angiotensin II,)在小鼠心肌微血管内皮细胞(myocardial microvascular endothelial cells,MMVECs)功能紊乱中的作用;方法:选用MMVECs作为实验细胞,用细胞复苏、细胞传代、细胞冻存方法培养MMVECs,将分为低浓度组(0.01、0.1、1μM)和高浓度组(10、100、1000μM)对MMVECs进行干预,用C
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目的:探讨血管紧张素II(Angiotensin II,)在小鼠心肌微血管内皮细胞(myocardial microvascular endothelial cells,MMVECs)功能紊乱中的作用;方法:选用MMVECs作为实验细胞,用细胞复苏、细胞传代、细胞冻存方法培养MMVECs,将分为低浓度组(0.01、0.1、1μM)和高浓度组(10、100、1000μM)对MMVECs进行干预,用CCK-8法检测各浓度对MMVECS细胞增殖的影响,生化检测各组MMVECs内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)含量水平;在实验结果中选用100μM的继续探索其在MMVECs中的损伤作用。将实验分为对照组与组(100μM),用流式细胞仪检测细胞凋亡程度、细胞线粒体膜电位;免疫荧光法检测P62、LC3B蛋白表达;Westernblot法检测Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、P62蛋白的表达水平;通过透射电子显微镜观察MMVECs中的自噬小体数量;结果:细胞增殖方面,低浓度组随着干预浓度的增加,细胞显著增殖;而在高浓度组中,浓度为10μM时,细胞增殖开始被抑制,并且随着浓度的不断增加,细胞增殖抑制率逐渐增加;在细胞活力方面,低浓度组中MDA含量随着浓度的增高逐渐增加,SOD含量随着浓度的增高逐渐下降,两者的增长趋势呈反比,但各组浓度之间MDA含量和SOD含量无明显差异,差异无统计学意义;在高浓度组中,随着持续增高,MDA含量显著增加,SOD活力却显著降低,并且各组浓度间含量有明显差异,差异具有统计学意义(P均<0.05)。随后选用100μM的干预MMVECs后,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,与对照组相比,AngⅡ组的JC-1 monomer值明显增加;WB法检测自噬相关蛋白,与对照组相比,组Beclin1以及LC3II/LC3I的值降低,而P62的值增加(P均<0.05);荧光免疫法检测,与对照组相比组MMVECs的LC3表达量降低,而P62表达量增加;透射电镜结果提示,与空白组相比组自噬小体数量减少。结论:低浓度组各组之间细胞的增殖有明显差异,随着浓度的增加,细胞增殖逐渐增高,但低浓度组对MMVECs中MDA、SOD含量的影响,各组浓度之间无明显差异,无统计学意义。高浓度组中各组浓度之间细胞增殖有明显差异,随着浓度的增加,细胞增殖被逐渐抑制,MDA含量增加,SOD含量降低,各组浓度之间有明显差异,差异具有统计学意义(P<0.05)。会增加MMVECs的凋亡,同时降低MMVECs的自噬水平,从而使MMVECs功能紊乱。
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