siRNA沉默Survivin对鼻咽癌细胞CNE2的影响

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目的:探讨siRNA沉默survivin基因表达对鼻咽癌细胞CNE2周期、增殖、凋亡及Caspase-3酶活性的影响,为鼻咽癌的基因治疗提供新的实验依据。方法:设计、合成两条不同特异性针对survivin基因的干扰序列a,b,将干扰序列构建至pGP/U6/GFP载体,经脂质体转染鼻咽癌细胞CNE2。采用流式细胞仪,检测细胞周期和细胞凋亡率;运用CCK-8试剂法,检测细胞的增殖;使用Caspase-3试剂盒,检测Caspase-3酶活性。结果:重组载体pGP/U6/GFP siRNA-Survivin a,b经基因测序鉴定,与设计干扰Survivin基因序列碱基插入方向一致,载体构建成功。siRNA沉默Survivin基因表达后,与空白对照组、阴性对照组比较,siRNA-Survivin a组、siRNA-Survivin b组细胞聚集在G0/G1期,G1期细胞增加,S期细胞减少(p﹤0.05);与空白对照组比较siRNA-Survivin a组、siRNA-Survivin b组细胞增殖受到抑制(p﹤0.05),siRNA-Survivin b组与siRNA-Survivin a组比较,细胞增值受抑制更明显(p﹤0.05); siRNA-Survivin b组凋亡率为(39.5%±0.79)高于空白对照组(2.65%±0.41)、脂质体组(3.25%±0.52)、阴性对照组(4.16%±0.62)及siRNA-Survivin a组(37.2%±0.71)(p﹤0.05);Caspase-3酶活性检测表明,与空白对照组、阴性对照组比较,siRNA-Survivin a组、siRNA-Survivin b组Caspase-3酶活性增强(p﹤0.05)。结论:1. siRNA沉默Survivin基因表达后,可抑制鼻咽癌细胞CNE2增殖,促进细胞凋亡,对G0/G1期有阻滞作用。2. siRNA沉默Survivin基因表达后,鼻咽癌细胞CNE2中Caspase-3酶活性增强。3. Survivin基因不同靶点的siRNA,对鼻咽癌细胞CNE2的影响有显著性差异。
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