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类风湿类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一种复杂的自身免疫性疾病，以慢性滑膜炎为特点。由于病因不明，目前尚没有特效药和根治方法，一直是医学界的一大难题。然而已有的研究认为RA的发病机制与滑膜成纤维细胞(Fibroblast-like synoviocytes，FLSs)的过度增殖及血管翳的生成有着密切的关系。本文主要研究的是KIAA1199在类风湿性关节炎滑膜细胞增殖及血管生成中作用。实验主要分为两部分: 第一部分 验证KIAA1199在RA中高表达以及评价其临床诊断意义 目的:课题组前期对滑膜成纤维细胞的比较蛋白质组学研究发现，KIAA1199在RA患者中的表达高于健康对照组。本研究采用大样本病例样本进一步验证KIAA1199在类风湿性关节炎中高表达，并且评价KIAA1199作为RA临床诊断指标的价值。 方法:首先通过实时定量PCR和免疫组织化学，验证KIAA1199在活动期和非活动期的RA患者的滑膜组织中表达量是否高于正常人。原代培养人的滑膜成纤维细胞，通过免疫细胞荧光实验，确定KIAA1199亚细胞定位。利用活动期和非活动期的RA患者和正常人中获取的血清、滑液和滑膜抽提液样品，采用酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测KIAA1199蛋白表达量，再通过受试者工作特征曲线(Receiver operator characteristic，ROC)分析，以曲线下面积(Area under curve，AUC)评价KIAA1199作为RA的诊断指标的意义。 结果:验证结果表明与正常人相比KIAA1199无论在mRNA还是蛋白水平在RA患者中表达均呈现高表达。免疫细胞荧光实验验证了KIAA1199在FLSs的胞质和胞膜表达。ELISA和ROC分析表明，KIAA1199在血清、滑液和滑膜组织中的浓度可以作为对活动期RA诊断的可靠性较高的生物标志物。对活动期RA的血清、滑液和滑膜组织进行ROC分析，得到AUC为0.83、0.92和0.91，敏感度分别为72％、84％和80％，特异度分别为80％、93.3％和93.3％。 结论:KIAA1199在活动期和非活动期的RA患者中的表达量高于正常人，并且可能是一个潜在的可用于RA临床诊断的生物标志物。 第二部分 KIAA1199的生物学功能以及其在血管生成中的作用机制 目的:研究KIAA1199的表达对FLSs增殖的影响，对血管生成的作用以及可能相关的信号通路。 方法:通过细胞转染KIAA1199 siRNA和过表达载体下调和上调KIAA1199表达量。采用MTT法分别检测转染24h、48h、72h、96h后，FLSs的增殖情况。采用Transwell和三维血管生成实验观察转染前后血管内皮细胞（Human vascular cells，HUVECs）细胞迁移能力和血管生成能力的影响。采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印记来测定FLSs内PLXNB3、SEMA5A、 CTGF的表达量，探索相关信号通路。 结果:MTT结果发现转染KIAA1199siRNA的FLSs增殖能力有所下降，而转染了pcDNA3.2 DEST-KIAA1199的FLSs增殖能力显著提高。在Transwell实验结果也证明了下调KIAA1199会降低HUVECs的迁移能力，而KIAA1199过表达能够增加HUVECs的迁移能力。三维血管生成实验中也是KIAA1199过表达组的血管生成较明显。qPCR和蛋白质免疫印记实验显示了无论是在mRNA水平还是蛋白质水平PLXNB3、SEMA5A和CTGF的表达变化都与KIAA1199表达变化一致。 结论:KIAA1199有提高FLSs增殖能力、促进血管生成的作用，而KIAA1199/PLXNB3/SEMA5A/CTGF途径可能是一个新发现的促进细胞增殖和血管生成的通路。