【摘 要】
:
目的:建立高灵敏度和准确度的制川乌单酯型生物碱检测方法,并优化单酯型生物碱的提取纯化工艺;建立大鼠血浆中苯甲酰新乌头原碱浓度的检测方法并进行方法学验证,研究其在大鼠体内的药代动力学特征,为制川乌单酯型生物碱类成分的药动学研究提供理论依据。方法:应用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS法)测定苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱含量,选择MRM检测模式,Ultimate AQ
论文部分内容阅读
目的:建立高灵敏度和准确度的制川乌单酯型生物碱检测方法,并优化单酯型生物碱的提取纯化工艺;建立大鼠血浆中苯甲酰新乌头原碱浓度的检测方法并进行方法学验证,研究其在大鼠体内的药代动力学特征,为制川乌单酯型生物碱类成分的药动学研究提供理论依据。方法:应用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS法)测定苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱含量,选择MRM检测模式,Ultimate AQ-C18 column(3.0μm,2.1×100mm)色谱柱进行色谱分离,柱温为40℃,流动相为0.1%甲酸水-甲醇=55:45,流速为0.4 ml·min-1;通过单因素试验考察粉碎粒度、提取次数、乙醇浓度、乙醇用量、提取时间因素对指标成分的影响,优选适宜的水平进行正交试验,确定最佳提取工艺;考察大孔树脂纯化过程中上样液浓度、上样液p H、解吸液浓度、上样液流速、最大上样量等因素,确定单酯型生物碱的最佳纯化工艺;建立HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆样本中苯甲酰新乌头原碱浓度的方法并进行方法学验证,MRM模式下分别以m/z 590.5→540.4和m/z 646.7→587.0为待测成分及内标的质谱检测条件,应用Ultimate AQ-C18 column(3.0μm,2.1×100mm)色谱柱进行色谱分离,柱温40℃,流动相为乙腈(A,含0.1%甲酸)-0.1%的甲酸溶液(B),梯度洗脱(0-0.5 min,25%A;0.5-3.5 min,25%-70%A;3.5-4.0 min,70%A),流速0.4 ml·min-1,进样量10μL。灌胃组大鼠分别灌服剂量为5、10、20 mg·kg-1的苯甲酰新乌头原碱溶液,静脉注射组大鼠按1 mg·kg-1的剂量静脉注射苯甲酰新乌头原碱,灌胃组给药后0h、0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、4h、6h、9h、12h和24h取血,静脉注射组给药后0h、0.05h、0.167h、0.33h、0.5h、1h、2h、4h、6h、9h、12h、24h和36h取血,血浆样品采用甲基叔丁基醚液液萃取并测定浓度,应用DAS2.0计算药动学参数。结果:最佳醇提工艺参数为制川乌中粉以25倍75%乙醇回流提取两次,每次1.5 h;大孔树脂纯化工艺参数选择上样液浓度0.50 g·ml-1、p H为3.5,上样液流速2 BV/h,最大上样量36 ml。血浆样本中苯甲酰新乌头原碱质量浓度为0.1~1 000ng·ml-1范围内线性关系良好,定量下限为0.1 ng·ml-1;苯甲酰新乌头原碱和内标的提取回收率均>93%,日内和日间RSD均<10.7%;苯甲酰新乌头原碱在血浆中质量浓度为0.2、5.0和200.0 ng·ml-1时,苯甲酰新乌头原碱和内标的提取回收率均较高且稳定,基质效应低,苯甲酰新乌头原碱样品在室温放置的变化率<4.6%;大鼠口服苯甲酰新乌头原碱的tmax约2 h,半衰期约为5 h,但生物利用度低不到1%,且AUC与剂量呈正比。结论:本实验优化后的制川乌单酯型生物碱提取纯化工艺稳定可行,为未来工业化大生产提供了理论支持,实验建立了大鼠血浆中苯甲酰新乌头原碱的浓度检测方法,该方法简单易行、灵敏度高,为单酯型生物碱类成分的药代动力学研究提供了一定的数据支撑。
其他文献
目的以急性生理与慢性健康状况评分系统(Acute Physiology and Chronic Health Evaluation II,APACHE II评分)为基础,探索与神经外科危重患者早期预警相关指标,构建神经外科危重患者早期预警评分,探究神经外科危重患者早期预警评分在神经外科危重患者预后中的预测价值。方法1.文献研究:检索国内外数据库,探索与神经外科危重患者早期预警相关指标,结合APAC
目的:评价后爪皮下注射及关节腔注射A型肉毒毒素(botulinum toxin type A Bo NT/A)两种治疗方法对单碘乙酸(monoiodoacetate MIA)骨性关节炎模型大鼠的镇痛效果,并对治疗后大鼠脊髓中P2X4嘌呤受体(P2X4R)表达量进行检测,以此探讨A型肉毒毒素镇痛作用机制。方法:将75只健康雄性SD大鼠采用随机数字表法随机分成5组,其中对照组15只,造模组60只,于对
研究背景及目的随着我国计划生育政策调整,高龄产妇逐渐增加,妊娠期重症急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis in pregnancy,SAPIP)的发生率也增加,一旦发生可能会危及母婴生命。据报道,该疾病有20-50%的死亡率,对母婴均有生命危险。为了探寻治疗该病及其引起的器官损伤的临床新思路,须深入研究其发生机制。Wnt信号通路的核心通路包括以下三条:首先是对细胞增殖起主
目的:探究在颅内动脉瘤夹闭术中电生理监测的使用价值,判断在术中电生理监测下临时阻断载瘤动脉的安全时长,为显微夹闭颅内动脉瘤术中进行临时阻断提供参考依据。方法:基于2019年6月至2020年6月对在青岛大学附属医院神经科确诊为颅内动脉瘤患者的回顾性分析研究,将术中使用电生理监测的97例患者的临床资料进行研究。所有患者术前均进行脑血管显影,如CTA或DSA等,确诊颅内动脉瘤后进行在电生理监测下的显微神
目的:急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)是肾切除术后严重的致死性并发症,可以进一步增加慢性肾脏病(Chronic kidney disease,CKD)的患病风险及死亡风险。然而,目前国内外指南主要依据肿瘤复发风险而非肾功能制定术后随访方案,针对术后肾功能监测周期及AKI恢复定义缺乏统一标准。因此,本课题旨在比较短暂性AKI、亚急性急性肾脏病(Acute kidney d
目的肺癌为常见的恶性肿瘤之一,是癌症相关死亡的主要原因。小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)是肺癌的亚型之一,是一种高度恶性肿瘤。在世界范围内,每年诊断为SCLC的人数约占全部肺癌的13%-16%,而SCLC的存活率却极低。近年来有研究显示许多脂类和脂类类似物是肿瘤发生的关键调节因子,目前随着脂质与肿瘤发生过程关系的研究逐渐深入,血脂水平检测与恶性肿瘤的发生与预后的
背景:吞咽是一项与生俱来的、不随意的生理反射,我们每天重复进行着数百次这样的无意识动作。良好的吞咽功能不仅可以帮助我们将食物安全地送入食管,而且可以将我们每日分泌的1-1.5L的唾液排出口腔,使口腔中的唾液始终保持在合适的含量。吞咽障碍(吞咽困难)是一种由于各种原因,包括神经发育疾病、脑外伤、脑卒中或神经退行性疾病引起的神经系统损害后常见的功能障碍。即使在没有急性神经系统损害的普通人群中,吞咽障碍
目的1.本研究通过循证对临床证据进行评价,运用德尔菲专家函询法,构建重症急性胰腺炎患者连续性血液净化集束化护理方案。2.探讨该方案对重症急性胰腺炎患者连续性血液净化平均滤器寿命、滤器凝血发生率、滤器清除效果、非计划下机发生率、连续性血液净化并发症发生率等的影响,为临床提高重症急性胰腺炎患者连续性血液净化的治疗与护理效果提供参考依据。方法1.第一部分干预方案的制定。首先提出循证问题,然后通过文献检索
随机性是现实交通网络的典型特征之一,其可来自于交通网络的供需两侧,或者是出行者的感知误差等。除此之外,实证研究表明出行者的路径选择行为受到出行时间、出行成本以及出行时间可靠度等多种属性的影响;同时,实证研究还表明出行者的路径选择行为会表现出行为人特性。本文研究在此背景下展开,采用目标导向型分析方法,构建出行者受随机多属性影响下的路径选择模型,并以此为基础,进一步分析了具有拥堵收费的随机交通网络中出
目的:为了探究不同类型根管及不同根管充填方法对根尖封闭性的影响,本研究选用了葡萄糖定量法以检测不同类型根管使用三种根管充填方法的根尖微渗漏大小,从而反映出根尖封闭性能的情况,以期为临床提供参考。方法:选取新鲜拔除的前磨牙和磨牙,使用金刚砂车针截取长度为10mm的牙根备用,经过CBCT拍摄后,选取符合条件的规则的直根管、椭圆根管及中重度弯曲根管的牙根各30个,为三个大组,然后随机将每个大组再分为三个