目的:建立高灵敏度和准确度的制川乌单酯型生物碱检测方法,并优化单酯型生物碱的提取纯化工艺;建立大鼠血浆中苯甲酰新乌头原碱浓度的检测方法并进行方法学验证,研究其在大鼠体内的药代动力学特征,为制川乌单酯型生物碱类成分的药动学研究提供理论依据。方法:应用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS法）测定苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱含量,选择MRM检测模式,Ultimate AQ-C18 column（3.0μm,2.1×100mm）色谱柱进行色谱分离,柱温为40℃,流动相为0.1%甲酸水-甲醇=55:45,流速为0.4 ml·min-1;通过单因素试验考察粉碎粒度、提取次数、乙醇浓度、乙醇用量、提取时间因素对指标成分的影响,优选适宜的水平进行正交试验,确定最佳提取工艺;考察大孔树脂纯化过程中上样液浓度、上样液p H、解吸液浓度、上样液流速、最大上样量等因素,确定单酯型生物碱的最佳纯化工艺;建立HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆样本中苯甲酰新乌头原碱浓度的方法并进行方法学验证,MRM模式下分别以m/z 590.5→540.4和m/z 646.7→587.0为待测成分及内标的质谱检测条件,应用Ultimate AQ-C18 column（3.0μm,2.1×100mm）色谱柱进行色谱分离,柱温40℃,流动相为乙腈（A,含0.1%甲酸）-0.1%的甲酸溶液（B）,梯度洗脱（0-0.5 min,25%A;0.5-3.5 min,25%-70%A;3.5-4.0 min,70%A）,流速0.4 ml·min-1,进样量10μL。灌胃组大鼠分别灌服剂量为5、10、20 mg·kg-1的苯甲酰新乌头原碱溶液,静脉注射组大鼠按1 mg·kg-1的剂量静脉注射苯甲酰新乌头原碱,灌胃组给药后0h、0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、4h、6h、9h、12h和24h取血,静脉注射组给药后0h、0.05h、0.167h、0.33h、0.5h、1h、2h、4h、6h、9h、12h、24h和36h取血,血浆样品采用甲基叔丁基醚液液萃取并测定浓度,应用DAS2.0计算药动学参数。结果:最佳醇提工艺参数为制川乌中粉以25倍75%乙醇回流提取两次,每次1.5 h;大孔树脂纯化工艺参数选择上样液浓度0.50 g·ml-1、p H为3.5,上样液流速2 BV/h,最大上样量36 ml。血浆样本中苯甲酰新乌头原碱质量浓度为0.1～1 000ng·ml-1范围内线性关系良好,定量下限为0.1 ng·ml-1;苯甲酰新乌头原碱和内标的提取回收率均>93%,日内和日间RSD均<10.7%;苯甲酰新乌头原碱在血浆中质量浓度为0.2、5.0和200.0 ng·ml-1时,苯甲酰新乌头原碱和内标的提取回收率均较高且稳定,基质效应低,苯甲酰新乌头原碱样品在室温放置的变化率<4.6%;大鼠口服苯甲酰新乌头原碱的tmax约2 h,半衰期约为5 h,但生物利用度低不到1%,且AUC与剂量呈正比。结论:本实验优化后的制川乌单酯型生物碱提取纯化工艺稳定可行,为未来工业化大生产提供了理论支持,实验建立了大鼠血浆中苯甲酰新乌头原碱的浓度检测方法,该方法简单易行、灵敏度高,为单酯型生物碱类成分的药代动力学研究提供了一定的数据支撑。