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本研究的主要目的是阐明低温引发的低温获能和获能发生机制差异以及探究冷冻稀释液中添加CLC对冻融猪配子质量的影响。试验主要分三部分,第一部分主要研究获能、顶体反应及低温获能处理对猪精子蛋白32(sp32)及其酪氨酸磷酸化的表达水平的影响;第二部分主要研究添加CLC对冻融猪精子获能状态线粒体膜电位以及质量特性的研究;第三部分主要研究添加CLC对冻融的GV期线粒体膜电位、促凋亡基因表达、透明带泛素化水平以及精子-ZP结合能力的影响。试验结果如下:1.获能、顶体反应及低温获能处理后结果表明,获能和顶体反应处理组sp32的表达水平显著高于鲜精组和低温获能处理组(P<0.05);2.获能和顶体反应处理组sp32酪氨酸磷酸化水平显著高于鲜精组和低温获能处理组(P<0.05);3.冷冻稀释液中添加CLC(0,0.5,1.0和2.0mg/mL)处理后结果表明,0.5 mg/mLCLC组活力、存活率和顶体完整率均高于其他三处理组组(P<0.05);而获能和顶体反应百分比低于其他三组(P<0.05);4.添加CLC能够显著提高4℃处理组和玻璃化冷冻处理组精子的线粒体跨膜电位(P<0.05);5.冷冻稀释液中添加CLC(0,0.5,1.0和2.0 mg/mL)处理后结果表明,10 mg/mL处理组荧光强度显著高于其他三组(P<0.05);6.5 mg/mL和10 mg/mL CLC处理组冻融后的GV期卵母细胞成熟率显著高于对照组(P<0.05);7.5 mg/mL CLC处理组冻融后的GV期卵母细胞线粒体膜电位高于其他两个处理组,但显著低于未冷冻的对照组(P<0.05);8.5 mg/mL和10 mg/mL CLC处理组冻融的GV期卵母细胞Caspase3、Caspase8和Caspase9基因表达均显著低于对照组(P<0.05);9.添加CLC处理组冻融的GV期卵母细胞精子-ZP结合能力显著高于对照组(P<0.05)。试验结论:1.sp32或精子蛋白酪氨酸磷酸化水平可以作为猪精子获能状态的一个生物标志物。2.CLC能改善冻融猪精子质量。CLC可提高冻融猪精子的活力、存活率和顶体完整率,降低冻融后猪精子获能状态和顶体反应的百分比,提高冻融猪精子的线粒体跨膜电位。3.CLC能改善冻融的GV期猪卵母细胞质量。CLC可提高玻璃化冷冻解冻后的GV期卵母细胞的成熟率、线粒体膜电位、ZP和ZP3蛋白泛素化水平;减少凋亡基因的表达以及提高冻融GV期卵母细胞精子-透明带结合能力。