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背景:颌面部肿瘤约占机体全部肿瘤的5%左右,而80%~90%属于鳞状细胞癌。虽然鳞癌的治疗手段得到了迅速的发展,但5年生存率在大多数肿瘤中仍然属于较低的一类。口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell cancer,OSCC)的治疗方法目前以外科手术为主,配合放疗及化疗可降低其局部复发率和减少淋巴结的转移率[1]。微小RNA(microRNA,miRNA)是一种非编码RNA,在恶性肿瘤的基因表达转录后调解中发挥重要作用。所以miRNA的表达异常与肿瘤的发生发展密切相关。其中,miRNA-21在很多实体细胞瘤中高表达并起着促癌基因的作用[2]。在化疗药物的选择上,顺铂仍是鳞癌化疗的重要药物,但是目前鳞癌肿瘤细胞显示出越来越明显的顺铂耐药性。表皮生长因子受体(Endothelial GrowthFactor Receptor,EGFR)为一种具有酪氨酸激酶活性的膜表面传感器,已有报道在人类的多种恶性肿瘤中表达增高[3]。同样在口腔鳞状细胞癌组织中,表皮生长因子的表达也呈现增高的趋势。本课题通过探讨microRNA-21在口腔鳞癌组织及人口腔鳞癌细胞系CAL27中的表达,观察microRNA-21受抑制后鳞癌细胞的增殖、凋亡及侵袭等生物学行为的变化,同时探讨microRNA-21受抑制后EGFR基因的mRNA和蛋白水平表达的变化及与顺铂敏感性之间的关系。 目的:探讨microRNA-21在口腔鳞癌组织中的表达水平,及在鳞癌细胞系CAL27中的生物学功能的初步研究,检测其在口腔鳞癌细胞系中与EGFR在mRNA和蛋白水平表达的关系,及其与顺铂敏感性之间的关系,为阐明miRNA-21在口腔鳞癌的发病机制,寻求有效的靶基因治疗提供理论基础。 方法:realtime PCR方法检测10例口腔鳞癌标本的microRNA-21的表达情况。口腔鳞癌组织及细胞系CAL27中转染microRNA-21 inhibitor后,检测其对鳞癌细胞的增殖、侵袭及凋亡的影响。同时采用microRNA-21 inhibitor瞬时转染口腔鳞癌细胞系,设立对照组,检测细胞系候选基因EGFR在mRNA水平和蛋白表达水平的变化。用四甲基偶氮唑蓝法测定microRNA-21 inhibitor作用后细胞系对顺铂的半数抑制浓度(IC50)的变化情况。 结果:1)miRNA-21在口腔鳞癌组织中表达明显上调,与对照组比较有显著性差异。2)miRNA-21 inhibitor转染口腔鳞癌细胞系CAL27后,细胞的周期发生了变化,细胞凋亡比率增高,侵袭能力降低。3)miRNA-21 inhibitor转染口腔鳞癌细胞系CAL27后,EGFR mRNA的表达减弱,EGFR蛋白水平的表达也相应降低。4)MTT检测细胞对顺铂的半数抑制浓度发现,转染后的细胞对顺铂的敏感性提高,miRNA-21 inhibitor组细胞与其他两组相比差异具有显著性。 结论:1)miRNA-21在口腔鳞癌组织中表达上调。2)在口腔鳞癌细胞系中,miRNA-21可以抑制口腔鳞癌细胞的凋亡、促进癌细胞增殖,起到了类似原癌基因的作用。3)miRNA-21 inhibitor能有效抑制口腔鳞癌细胞EGFRmRNA和蛋白的表达,验证EGFR可能是miR-21的作用靶基因,并且miRNA-21受抑制后EGFR在mRNA水平和蛋白水平上表达均有改变,进一步说明在口腔鳞癌组织中,EGFR的高表达与miRNA-21的升高密切相关。4)同时抑制miRNA-21可以部分恢复口腔鳞癌细胞对顺铂的敏感性。