【摘 要】
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背景:阿霉素（Doxorubicin,DOX）是临床常用的蒽醌类抗肿瘤药物,广泛用于儿童白血病,淋巴瘤以及实体肿瘤等,可显著提高患儿生存率。然而它在心脏中特异性蓄积导致的心脏毒性严重限制其临床使用,由于儿童敏感性高、耐受性低,DOX引起的心脏毒性问题在儿科更为普遍。其心脏毒性的病理生理机制尚未完全阐明,且缺乏有效的预防和治疗方法。目的:研究选择性α1-肾上腺素能受体激动剂去氧肾上腺素（Phenyl
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背景:阿霉素（Doxorubicin,DOX）是临床常用的蒽醌类抗肿瘤药物,广泛用于儿童白血病,淋巴瘤以及实体肿瘤等,可显著提高患儿生存率。然而它在心脏中特异性蓄积导致的心脏毒性严重限制其临床使用,由于儿童敏感性高、耐受性低,DOX引起的心脏毒性问题在儿科更为普遍。其心脏毒性的病理生理机制尚未完全阐明,且缺乏有效的预防和治疗方法。目的:研究选择性α1-肾上腺素能受体激动剂去氧肾上腺素（Phenylephrine,Phe）及抑制剂哌唑嗪（Prazosin,Pra）对阿霉素（Doxorubicin,DOX）诱导心肌细胞凋亡的影响。为研究α1-肾上腺素能信号通路心肌保护的分子机制、开发治疗DOX心脏毒性药物提供新的理论基础。方法:培养大鼠心肌细胞系H9C2共4组,除对照组外均给予DOX1.8μM,同时加入Phe 0.1m M为激动剂组、加入Pra 10μM为抑制剂组,培养24小时后流式细胞术及TUNEL染色检测细胞凋亡;CCK-8检测细胞活力;实时定量PCR检测Bcl-2家族抗凋亡基因及促凋亡基因m RNA水平;Western blot检测凋亡效应物Cleaved-Caspase3表达。结果:DOX可以诱导明显的心肌细胞凋亡,激动剂组心肌细胞凋亡率在此基础上降低,抑制剂组心肌细胞凋亡率在此基础上升高（均P＜0.05）;CleavedCaspase3表达量变化与此一致（P＜0.05）。实时定量PCR显示激动剂组抗凋亡基因Bcl-2、Bcl-w m RNA水平较DOX组升高,抑制剂组降低（均P＜0.05）;Bax、Bad变化方向相反。给药24小时后激动剂组细胞活力较DOX组增高,抑制剂组细胞活力进一步下降（P＜0.05）。结论:DOX诱导的心肌细胞凋亡受α1-肾上腺素能信号通路调节,激活该信号通路有一定的心肌保护作用。背景:先天性心脏病（congenital heart defects,CHD）是由于胚胎期心脏结构发育异常导致的先天畸形,发病率居我国出生缺陷首位,但其发病机制尚未完全阐明。近年来,越来越多的研究报道长链非编码RNA（Long non-coding RNA,lnc RNA）参与心肌祖细胞分化、心脏发育及心血管疾病发生,但其在人类心脏发育中的功能仍有待研究。目的:对人类胚胎样本转录组芯片进行检测,通过数据分析筛选可能参与人类胚胎心脏发育的lnc RNA,阐明其生物学特性,探索其参与人类心脏发育的作用及机制。方法:收集Carnegie stage10-16正常发育的人类胚胎心脏组织,混合抽提RNA进行转录组芯片检测及分析,筛选可能参与心脏发育的目标lnc RNA,分析其编码能力,通过3’5’RACE阐明其全长信息,q PCR验证其在不同阶段胚胎心脏中的表达量变化;通过人类胚胎干细胞（human stem cell,h ESC）定向分化心肌细胞模拟人类胚胎心脏发育过程,在探明分化过程中lnc RNA表达趋势的前提下,通过sh RNA干扰其表达,观察对心肌分化的影响;通过RIP等实验探索目标lnc RNA在心脏发育中的功能及作用机制。结果:通过生物信息学分析发现lnc CPDR可能参与人类胚胎心脏发育,且与心脏发育相关重要转录因子TBX5存在相互作用。研究结果阐明lnc CPDR在早期人类胚胎心脏中表达,全长4085nt,在人类胚胎干细胞定向分化为心肌细胞的第五天高表达,与TBX5表达趋势一致,分布于细胞核及细胞浆;sh RNA干扰其表达后干细胞多能性不受影响,但是分化为心肌细胞的效率下降;RIP结果证实lnc CPDR与TBX5有直接结合。结论:本研究建立了人类早期胚胎心脏发育的lnc RNA表达谱,发现lnc CPDR可通过与转录因子TBX5结合参与人类心肌细胞分化及心脏发育过程。为拓宽心脏发育调控网络,完善TBX5在心脏发育中的调控机制提供了理论依据。
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目的:观察抗性糊精对肥胖小鼠肝脏胰岛素抵抗的影响,并探索其潜在的机制。方法:分别采用两种动物模型进行实验。第一种动物模型采用8周龄SPF级雄性db/db（C57BL/Ks J）小鼠10只,随机分为对照组和抗性糊精处理组,每组5只,分别予以蒸馏水和抗性糊精灌胃9周。第二种动物模型采用4周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠17只,适应性喂养1周后,随机分为两组,普通饮食（Normal diet,ND）
目的:圆锥动脉干畸形是一类复杂的先天性心脏畸形,是导致婴幼儿死亡的主要病因,大量报道认为其发病机制是与基因遗传因素有关,但其主要的遗传机制尚未阐明。我们通过在大样本人群中筛选突变基因并探究其致病机制,然后对肺动脉闭锁伴室间隔缺损进行全外显子测序探究拷贝数变异在其发病机制中的作用。方法:第一部分通过靶向测序在圆锥动脉干畸形人群中筛查TBX2和TBX3基因突变,选择蛋白改变预测有害和保守性高的突变,进
目的:探讨脂肪源性间充质干细胞（ADSCs）移植,对哮喘的治疗作用及对2型固有淋巴细胞的影响。方法:取4周龄C57BL/6小鼠腹股沟白色脂肪组织分离、培养并鉴定ADSCs;以卵清蛋白制备哮喘模型并鉴定。40只野生型C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、细胞对照组、哮喘模型组、细胞治疗组。细胞对照组、细胞治疗组通过尾静脉注射1×10~5 ADSCs,末次激发24h后取小鼠肺组织进行HE染色及荧光染色
目的课题组前期通过全转录测序分析结果得出CCR5与BPD的发病有关,CCR5主要表达于单核、巨噬细胞和淋巴细胞等,CCR5及其配体在细胞迁移中发挥了重要的作用,本研究主要探究CCR5在BPD的肺泡化阻滞过程中的作用及其作用机制。方法第一部分:收集BPD患儿外周静脉血,采用ELISA检测BPD患儿血清中CCR5配体CCL3、CCL4、CCL5的表达水平,流式细胞技术检测BPD人群样本单核细胞中CCR
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先天性心脏病是活产新生儿中的发病率最高的先天性畸形之一。复杂性先天性心脏畸形如右室双出口、大动脉转位、肺动脉闭锁/室间隔缺损等是造成新生儿时期死亡率高的重要原因,也是目前研究的热点之一。内脏异位常常合并复杂先天性心脏畸形,影响手术预后。正常内脏位置由胚胎时期体轴的左右不对称分化决定,分化过程中受到精细的基因调控。第一部分内脏异位患儿DNAI1和DNAH5基因编码区突变分析目的:分析内脏异位综合征患
目的:子宫内膜损伤修复障碍是不孕症治疗的瓶颈。当损伤累及内膜基底层时会造成内膜再生障碍,无法自身修复。应用骨髓间充质干细胞（BMSCs）修复子宫内膜是临床研究的方向,但内膜的局部微环境遭到破坏使得外源性植入的干细胞存活率低下,影响了干细胞增殖和分化的能力。为改善BMSCs的“移植效率”,本研究中我们首先模拟干细胞所处的内膜微环境,明确内膜间质及雌激素（E2）对BMSCs分化的作用;此后,我们建立了
目的:对胃癌耐受顺铂细胞中micro RNA（miR-21）介导的自噬活动进行验证,并且深入探究其中的过程及潜在机制。方法:（1）构建耐顺铂胃癌细胞系并验证。选取较易对化疗药顺铂产生耐药性的人胃癌细胞株:SGC7901。长时间逐步增加作用于SGC7901的顺铂浓度,诱导其产生耐药性;用MTT法检测细胞存活率,并计算出半数抑制浓度（IC50）,最终获得耐顺铂人胃癌细胞株,命名为SGC7901/DDP
目的:动脉粥样硬化（AS）是心血管疾病的主要原因,衰老引起的内皮损伤和功能障碍是AS典型的危险因素。近年来,一些研究表明,内皮祖细胞（EPCs）在替代损伤血管内皮细胞的过程中起着至关重要的作用,替代受损内皮细胞的能力取决于它们的数量和功能。然而,EPCs随着衰老功能逐渐退化,表现出细胞活力降低,迁移缓慢和血管生成能力下降。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）是一种参与各种生物学功能的关键分子。腺苷二磷