研究背景子宫内膜异位症是一种主要发生在育龄期妇女的常见妇科疾病,它表现出来的盆腔疼痛和不孕等临床症状已经严重影响了现代女性的身心健康,因此近年来日益受到众多研究者的广泛关注。子宫内膜异位症在普通人群中的发病率为10%-15%。目前其确切的病因和病理机制仍不清楚,但经典的病因学说有内膜种植学说、体腔上皮化生学说、淋巴回流学说、免疫学说等,近年来认为遗传因素、环境因素也同样影响了子宫内膜异位症的易感性。子宫内膜异位症虽是一种良性疾病,但却表现出与恶性肿瘤相似的生物学特性,如细胞的非典型性增生、浸润、转移、新生血管形成及遗传的不稳定性等。其中,子宫内膜的异位侵袭是内异症的重要特点。可以推论,一些在肿瘤浸润转移中发挥重要作用的分子可能在子宫内膜的异位侵袭中也有着相似的作用。在过去几年中,有研究探讨了金属基质蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)等肿瘤侵袭促进因子在内异症发病中的作用,这些研究常着重于MMPs等降解细胞外基质的效应分子,而这些分子的上游水平存在哪些调控因子,及其与这些因子相互作用的研究却比较少见。c-fos是一种雌激素即刻早期基因,可对雌激素作用发生早期应答。近年有研究证实c-fos可通过调节MMPs的表达促进肿瘤细胞的浸润。MMP-9是降解细胞外基质的重要酶类,它不仅促进肿瘤浸润转移过程,同时在内异症的发病中也发挥了重要作用。值得一提的是,在MMP-9基因启动子上游存在转录因子AP-1的结合位点,提示作为转录因子AP-1重要构成亚单位的c-fos蛋白可参与调节MMP-9基因的表达,从而促进细胞的浸润转移。已有研究显示c-fos通过调节MMP-9表达水平而促进肿瘤细胞侵袭。正因为子宫内膜异位症与肿瘤有着诸多的相似之处,我们设想,c-fos和MMP-9是否在子宫内膜异位症发病中有着类似的作用呢?目前国内外尚未有研究探讨c-fos基因在人子宫内膜异位症发病中的作用,该研究在国际上首次于人类体内及体外实验中探讨了c-fos在内异症发生发展中的作用,并首次将c-fos与细胞外基质降解因子MMP-9及异位子宫内膜赖以生存的雌激素联系起来,从疾病诱因到信号整合分子再到效应分子的整体角度分析了三者在子宫内膜细胞侵袭中的作用。同时,该研究在国内首先将Boyden侵袭小室应用于子宫内膜细胞侵袭的研究,为探讨内异症的发病机理提供了新的方法和途径。我们首先检测了c-fos及MMP-9蛋白在正常子宫内膜以及内异症患者在位和异位内膜组织中的表达,分析c-fos蛋白表达与MMP-9蛋白表达及患者血清雌激素水平的相关性,然后在体外实验中研究了雌激素、c-fos及MMP-9在子宫内膜细胞侵袭中的作用以及它们之间的相互关系,以期探讨子宫内膜异位症的病理发生机制并试图找到一种治疗子宫内膜异位症的新途径。第一部分c-fos、MMP-9在子宫内膜异位症患者在位和异位子宫内膜以及正常人子宫内膜组织中的表达目的:通过检测c-fos、MMP-9在子宫内膜异位症患者及正常人子宫内膜组织中的表达,分析它们之间以及和血清雌激素水平的相关性,探讨c-fos、MMP-9在子宫内膜异位症发生发展中的作用。材料与方法:收集子宫内膜异位症患者(以下简称内异症)配对在位及异位内膜25例(增生期14例、分泌期11例),正常人子宫内膜30例(增生期17例、分泌期13例),同时获取患者血清。采用免疫组织化学法对c-fos蛋白表达定位,蛋白免疫印迹(Western blotting)检测上述三组子宫内膜组织中c-fos及MMP-9蛋白表达水平,电化学发光免疫测血清雌二醇水平。结果:c-fos蛋白主要定位于子宫内膜细胞核;相对于正常人子宫内膜,c-fos及MMP-9在内异症患者在位及异位内膜的蛋白水平较高;而它们在内异症患者在位及异位内膜之间的表达水平没有显著差异;三组内膜组织都显示c-fos表达在增生期高于分泌期,仅正常内膜显示MMP-9蛋白表达增生期高于分泌期;c-fos与MMP-9蛋白表达呈正相关,并且增生期正常人内膜及异位症患者在位内膜c-fos表达与血清雌二醇水平呈正相关。结论:c-fos及MMP-9在内异症患者在位和异位内膜组织的异常表达可能参与了子宫内膜异位症的病理发生与发展。第二部分Boyden侵袭小室在子宫内膜细胞侵袭研究中的作用目的:探讨Boyden侵袭小室在子宫内膜细胞侵袭研究中的作用。材料与方法:收集非内异症良性疾病行子宫切除的患者子宫内膜,分离培养子宫内膜基质细胞。Boyden侵袭小室观察雌激素及其受体阻断剂对子宫内膜基质细胞侵袭力的作用。结果:各组细胞都发生侵袭。雌激素作用组子宫内膜基质细胞侵袭数目较对照组增多,而雌激素受体阻断剂或与雌激素共同作用组细胞侵袭数目与对照组无显著差异。结论:Boyden侵袭小室实验与内异症雌激素依赖性的临床表现及子宫内膜基质细胞上存在雌激素受体的基础研究一致,提示它是研究子宫内膜细胞侵袭现象的有力模型,为探索子宫内膜异位症发病机制提供新的方法和途径。第三部分c-fos、MMP-9在雌激素促进子宫内膜细胞侵袭中的作用目的:探讨c-fos、MMP-9在雌激素促进子宫内膜细胞侵袭中的作用材料与方法:收集非内异症良性疾病行子宫切除的患者子宫内膜,分离培养子宫内膜基质细胞;观察雌激素及其受体阻断剂对基质细胞c-fos、MMP-9蛋白表达水平的影响;采用siRNA分别干扰基质细胞c-fos、MMP-9的表达,结合Borden侵袭小室观察c-fos、MMP-9基因沉默的基质细胞在雌激素作用下侵袭力的改变,同时观察c-fos基因沉默基质细胞在雌激素作用下MMP-9蛋白表达水平的改变。结果:①雌激素作用于子宫内膜基质细胞使c-fos、MMP-9表达水平上升,但雌激素受体阻断剂可抑制此现象;②对照组、雌激素组、雌激素作用的siRNA干扰组细胞均发生侵袭,雌激素作用组细胞侵袭数目最多,c-fos或MMP-9siRNA干扰的细胞在雌激素作用下侵袭数目较雌激素组减少,但仍多于对照组;③c-fos siRNA干扰的细胞在雌激素作用下MMP-9蛋白表达水平较对照组无显著差异。结论:①雌激素以受体依赖性方式作用于c-fos,继而引发MMP-9基因表达增强,最终提高子宫内膜基质细胞侵袭力;②MMP-9、c-fos可能是雌激素促进子宫内膜基质细胞侵袭的途径之一。