山羊PTEN基因的变异位点及组织表达分析

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yellow1989
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PTEN(phosphate and tension homology deleted on chromosome ten)基因是人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因,属于蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatases,PTP)基因家族。PTEN基因最初被认为是抑癌基因,但是PTEN基因也在哺乳动物细胞的生长、器官的发育以及糖代谢、胰岛素抵抗等方面发挥作用。因此,探究PTEN基因在山羊上的表达特征和作用机制具有重要意义。本研究通过克隆山羊PTEN基因编码区全序列以及3’UTR区域变异位点的检测,探究PTEN基因的分子特征。RT-qPCR的方法检测了其在胚胎期90天(E90)、胚胎期135天(E135)和出生后90天(P90)的山羊心、肝、脾、肺、肾、脑、腰大肌和背最长肌8个组织中的表达差异以及在山羊前体脂肪细胞分化过程中PTEN基因的表达特征。主要结果如下:1、简州大耳羊PTEN基因的编码区长度为1212 bp,编码403个氨基酸。其GenBank登录号为:MG923848。PTEN蛋白是亲水蛋白,含有26个磷酸化位点,1个信号肽。山羊的PTEN基因序列与绵羊,牛PTEN基因亲缘关系较近,与马PTEN基因亲缘关系最远。在PTEN基因的3’UTR区发现了3个SNPs和1个indel,分别是g.84 T>C(rs648781865),g.996 T>C(rs 661678942)和未报道的g.1007 C>A,g.1103104 de lAT。2、RT-qPCR结果显示PTEN基因在E90、E135和P90简州大耳羊的心、肝、脾、肺、肾、脑、腰大肌和背最长肌组织中均有表达。E90的肝组织中检测到的PTEN基因表达水平相对较高(P<0.05);E135的肺组织中检测到的PTEN基因表达水平相对较高(P<0.05),心和腰大肌中表达水平较低(P<0.05);P90的脾组织中PTEN表达量较高(P<0.05)。蛋白免疫印迹杂交结果显示,在E135的8个组织中,PTEN蛋白在心、脾和脑组织中表达量显著高于其他五个组织(P<0.05),而背最长肌中的表达量显著低于其他7个组织(P<0.05)。此外,PTEN蛋白在简州大耳羊肺组织中的表达量随日龄呈下降趋势。3、DAB显色原位杂交的方法检测了PTEN基因在P90简州大耳羊8个组织中的分布规律。结果发现PTEN基因在肝、脾、肺和肾组织中表达较高,在心、脑和腰大肌和背最长肌中表达较低,与RT-qPCR的结果一致。4、探究PTEN基因在山羊前体脂肪细胞分化过程中的表达变化,结果PTEN基因的表达量总体呈现逐渐降低的趋势,在分化第10天略有升高。而且分化第2天PTEN基因的表达量显著高于其他4个时间点(P<0.05)。
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