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目的：本研究通过培养人牙周膜成纤维细胞，采用冷冻干燥法制备壳聚糖/磷酸三钙复合材料并将血小板源性生长因子、壳聚糖/磷酸三钙支架材料及牙周膜成纤维细胞进行体外联合培养，初步探讨血小板源性生长因子对牙周膜成纤维细胞在该支架材料上三维立体培养的影响，为今后血小板源性生长因子在牙周组织工程中的进一步应用提供实验基础。
方法：本研究分为两部分：
1、人牙周膜成纤维细胞(periodontalligamentfibroblast，PDLF)的体外培养及鉴定：取临床上因正畸治疗需要而拔除的健康新鲜减数牙，洗去根面血污后刮取根中1/3处的牙周膜组织，用组织块培养法进行人PDLF的原代培养，按1:4传代培养，取第5代细胞用于实验。以广谱角蛋白、波形蛋白按常规ABC法鉴定细胞起源；倒置显微镜观察原代及传代培养的PDLF细胞。
2、血小板源性生长因子(plateletderivedgrowthfactor-BB，PDGF-BB)与壳聚糖/磷酸三钙支架材料应用于牙周组织工程的初步研究：采用壳聚糖和磷酸三钙通过冷冻干燥法制备成壳聚糖/磷酸三钙(Chitosan/Tricalciumphosphate，CTCP)复合材料，并将已纯化且连续传代的第五代PDLF在CTCP支架材料上进行培养。并按加入培养液的不同进行分组。以单纯加入DMEM培养液为对照组；以加PDGF-BB为实验组：将PDGF-BB用DMEM培养液稀释，按终浓度分为以下三组：1ng/ml组、10ng/ml组、100ng/ml组。各浓度PDGF-BB组及对照组分别接种9份标本。标准环境下(37℃、5％CO2、饱和湿度)孵育24h，对细胞计数，折算成每平方毫米面积的材料上细胞数，再计算每组的平均值。按同样的分组方法，每孔接种细胞悬液后在标准环境下孵育24h后弃去液体，实验组加入含PDGF-BB的DMEM培养液，PDGF-BB终浓度同前，对照组只加DMEM培养液。标准环境下孵育72h后对细胞计数，方法同前。并分别在培养24h和72h后，PDGF-BB(100ng/ml)组和对照组各随机取出1份标本行扫描电镜观察。各组样本实验数据以x±s表示，行单因素方差分析。采用SPSS11.0软件计算。72h增殖率=(72h吸附细胞数-24h吸附细胞数)/24h吸附细胞数。
结果：扫描电镜结果显示CTCP支架材料具有良好的多孔网状结构，孔隙互相通连。细胞在支架材料上可呈长梭形、圆形或成片生长。PDGF-BB(100ng/ml)组较对照组其细胞与CTCP支架材料的伸展更充分，附着状态有所改善。细胞计数结果显示：与对照组相比，各浓度PDGF-BB组培养24h后均可促进hPDLF在CTCP支架材料上的附着，呈浓度依赖关系，差异具有统计学意义(P＜0.05)，其中100ng/ml为最有效浓度。同时，不加PDGF-BB时，72hhPDLF增殖率为41.4％；加入1ng/ml、10ng/ml和100ng/mlPDGF-BB时，hPDLF其72h增殖率分别为为143.0％、188.6％和217.4％：与24h结果相比，PDGF-BB各浓度组培养72h后均能促进hPDLF在CTCP支架材料上的增殖，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
结论：
(1)采用冷冻干燥法制备的壳聚糖-磷酸三钙复合支架材料具有良好的三维多孔结构，能够满足组织工程支架材料的基本要求。人牙周膜成纤维细胞与壳聚糖.磷酸三钙复合材料具有良好的细胞相容性和细胞亲和性。
(2)PDGF-BB能促进人牙周膜成纤维细胞在壳聚糖-磷酸三钙复合支架材料上的增殖，并可改善人牙周膜成纤维细胞在壳聚糖-磷酸三钙复合支架材料上的附着状态。
(3)将人牙周膜成纤维细胞在壳聚糖-磷酸三钙复合支架材料上进行三维立体培养并复合以PDGF-BB是一种较为理想的牙周组织工程应用模式，不仅具有重要的理论意义，而且具有广阔的临床应用前景。