【摘 要】
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塞内卡病毒（SVA）为小RNA病毒科,塞内卡病毒属的成员,其感染猪主要临床症状表现为口鼻、口腔粘膜、冠状血管带、蹄上的水泡和溃疡性病变。SVA作为新发传染病在我国的暴发与流行,给养猪业造成了巨大损失。然而,目前该病并无有效疫苗及配套的相关诊断试剂,因此,本研究聚焦于SVA结构蛋白VP2,制备VP2多克隆抗体和单克隆抗体,以期为SVA疫苗和诊断技术提供研究基础。本研究首先利用常规分子克隆技术将SVA
【基金项目】
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山西农业大学博士科研启动项目（2020BQ59）；
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塞内卡病毒（SVA）为小RNA病毒科,塞内卡病毒属的成员,其感染猪主要临床症状表现为口鼻、口腔粘膜、冠状血管带、蹄上的水泡和溃疡性病变。SVA作为新发传染病在我国的暴发与流行,给养猪业造成了巨大损失。然而,目前该病并无有效疫苗及配套的相关诊断试剂,因此,本研究聚焦于SVA结构蛋白VP2,制备VP2多克隆抗体和单克隆抗体,以期为SVA疫苗和诊断技术提供研究基础。本研究首先利用常规分子克隆技术将SVA的VP2基因克隆至原核表达载体p ET-28a上,经IPTG诱导,成功获得以包涵体形式表达的重组VP2蛋白。将经过Ni柱亲和层析纯化的重组VP2蛋白皮下免疫雌性新西兰大白兔,制备多克隆抗体,经免疫印迹、IFA、ELISA和中和活性鉴定,所制备的多克隆抗体特异识别病毒VP2蛋白,并且具有较高的中和效价。为制备VP2单克隆抗体,将纯化的VP2蛋白免疫6-8周龄的BALB/c小鼠,经细胞融合和筛选,成功获得一株分泌VP2的单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C9,其细胞上清效价为1∶1000,经免疫印迹、IFA、ELISA和中和活性鉴定,单克隆抗体2C9可特异性识别病毒VP2蛋白。综上所述,本研究成功表达了VP2蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,所制备的多克隆抗体和单克隆抗体能特异识别SVA的VP2蛋白,为SVA基础研究及疫苗与诊断试剂研发提供了重要的研究材料。
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