层柱粘土固定β-D-葡萄糖醛酸苷酶及其催化合成GAMG的研究

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层柱粘土(Pillared Interlayered Clay,简称PILC)是一种多孔固体材料,由于其比表面积大、孔径和酸性可调控等特点在催化领域得到了广泛应用。蒙脱石是用于制备层柱粘土的主要材料,膨润土是以蒙脱石为主的粘土质矿石,新疆夏子街地区是世界膨润土资源最丰富的地区之一,远景储量达50亿吨。然而,膨润土因产地不同,成分也相差甚远,本文尝试了以新疆夏子街地区膨润土为材料制备层柱粘土,采用吸附法固定化β-D-葡萄糖醛酸苷酶。探讨了利用不同性质膨润土制备的层柱粘土对固定化酶活性的影响,并对优选出的层柱粘土进行了固定β-D-葡萄糖醛酸苷酶及其转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)的研究,得到以下主要结论:1.通过X-射线衍射(XRD)、N2吸附-脱附、傅立叶变换红外光谱(FT-IR)及扫描电镜技术(SEM),对优选出的载体进行了表征,结果发现:层柱粘土的比表面积由原土的57.99 m2/g提高到177.0 m2/g,BJH脱附孔容由0.059 mL/g增大至0.25 mL/g,是一种良好的酶固定化载体,可以通过氢键等作用力将酶固定在其上。2.探讨了给酶量、缓冲液pH、温度和固定化时间对固定化β-D-葡萄糖醛酸苷酶活性、固定率的影响,结果表明:最佳的固定化反应条件为给酶量2700 U/g载体、pH值为3.6、温度40℃、固定化反应时间60 min,在此条件下制得的固定化β-D-葡萄糖醛酸苷酶最高酶活可达1790 U/g载体,固定化条件温和,固定化得率高。3.以甘草酸为底物研究了固定化酶的性质、催化性能,并与游离酶进行对比,结果表明:固定化酶的最适催化条件pH值为6.0,温度为60℃,反应动力学常数Km为1.35 mmol·L-1,在甘草酸浓度为2 g/L,固定化酶添加量为20 U/mL底物时表现出最大催化活力。与游离酶相比,固定化酶催化合成GAMG的最适pH向碱性方向偏移,最适催化温度提高了10℃,但对底物的亲和性有所下降;酶经固定化后催化特异性没有改变,储存稳定性有较大提高,具有一定的操作稳定性。本文在研究新疆夏子街地区不同性质膨润土制备层柱粘土的基础上,开发利用其固定β-D-葡萄糖醛酸苷酶,并研究了其催化性能,为新疆优势矿产资源膨润土的深加工提供了重要的应用途径和基础数据。
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