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阿特拉津(Atrazine)是一种具有低毒、使用量大、残留期长、污染范围广等特点的除草剂,它能干扰内分泌系统,具有一定的遗传、生殖和免疫毒性。活性氧参与多种疾病的发生发展过程,为探讨阿特拉津对机体的氧化损伤作用及机制,本课题进行了如下研究:
目的:通过体内试验,研究阿特拉津对机体的氧化损伤作用及其机制。
方法:将Balb/c小鼠随机分为低剂量组(100mg/kg)、中剂量组(200mg/kg)、高剂量组(400mg/kg)、阳性和阴性对照组,经口灌胃染毒21天。用分光光度法检测血清中的氧化型谷胱甘肽(GSSG)、还原型谷胱甘肽(GSH)和蛋白质氧化的终末产物(AOPP)含量,利用能斯特方程计算GSH/GSSG氧化还原电位;用流式细胞仪检测小鼠免疫细胞中活性氧(ROS)含量;用单细胞凝胶电泳法检测免疫细胞DNA的损伤;同时应用Western blotting法检测脾脏细胞中NF-κB3 p65蛋白和Ref-1蛋白的表达;应用RT-PCR检测脾脏细胞中HO-1mRNA和Gpx1mRNA的表达。
结果:阿特拉津可造成免疫细胞内ROS持续增高,并有剂量-反应关系,使机体处于氧化应激状态,造成对生物大分子的损害。
阿特拉津引起机体GSH含量和GSH/GSSG比值逐渐减少,GSSG含量和氧化还原电位逐渐升高,使机体氧化还原态向氧化方向偏移。
阿特拉津致机体中蛋白质氧化的终末产物(AOPP)含量逐渐增多,引起机体蛋白质氧化损伤,改变蛋白质的生物化学性质和结构,导致功能障碍。
阿特拉津使免疫细胞的尾DNA含量、彗星尾长、尾矩和Olive尾矩增加,并呈剂量-反应关系,损伤免疫细胞中的DNA。
阿特拉津诱导脾脏细胞中Ref-1蛋白表达增加,从而激活转录因子NF-κB,使NF-κB p65蛋白表达增加。
阿特拉津诱导抗氧化酶HO-1mRNA和Gpx1mRNA表达量升高,调节机体的氧化还原状态。
结论:阿特拉津能造成机体ROS含量升高,GSH含量减少,GSSG含量增高,氧化还原电位向氧化方向偏移,使机体处于氧化应激状态。过量的ROS,造成DNA链断裂和突变,蛋白质中肽链断裂和形成交联聚合物,损伤生物大分子。诱导Ref-1和NF-κB p65蛋白表达增加,修复受损DNA,促进基因转录。同时提高抗氧化酶Hmox1mRNA和Gpx1mRNA表达量,进一步调节机体的氧化还原状态,减少细胞损伤和凋亡。