【摘 要】
:
目的:分离及克隆胰腺癌BxPC-3和PC-3细胞基因组中反义K-ras基因片段(外显子1及其侧翼序列,外显子4B及其侧翼序列),构建含反义K-ras癌基因的重组逆转录病毒载体,并制备含反义K-r
论文部分内容阅读
目的:分离及克隆胰腺癌BxPC-3和PC-3细胞基因组中反义K-ras基因片段(外显子1及其侧翼序列,外显子4B及其侧翼序列),构建含反义K-ras癌基因的重组逆转录病毒载体,并制备含反义K-ras癌基因重组逆转录病毒,在体外和体内水平探讨其治疗胰腺癌的作用及其分子机制。方法:设计2对PCR引物,分别在上下游引物中引入BamHI和EcoRI位点,分别以胰腺癌细胞株BxPC-3和PC-3细胞基因组DNA为模板扩增出反义K-ras基因外显子1,4及侧翼序列,BamHI和EcoRI双酶切PCR产物及空载体pLXSN,用T4连接酶作用后构建重组逆转录病毒载体,经G418筛选后获得抗性克隆。予菌液PCR和限制性内切酶酶切及序列分析鉴定正确后命名为pLXSN-AS-exonl和pLXSN-AS-exon4B,利用脂质体将其转导入PT-67细胞(逆转录病毒包装细胞),再经G418筛选得到抗性克隆。将抗性PT-67细胞进行扩大培养,得到含重组逆转录病毒的上清。将重组逆转录病毒上清感染胰腺癌BxPC-3和PC-3细胞,筛选得到抗性细胞,利用MTT法检测其细胞增殖情况;RT-PCR法检测K-ras mRNA;免疫组化(SABC法)进行p21表达和凋亡相关基因Fas、FasL、Bax、Bcl-2的表达研究。感染重组病毒前后的胰腺癌BxPC-3和PC-3细胞予碘化丙锭(PI)染色,70%酒精固定后送流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。应用重组逆转录病毒pLXSN-AS-exonl和pLXSN-AS—exon4B 200μL连续3天注入裸鼠胰腺癌接种局部,每周观察移植瘤的大小和体积,待8周后处死称重。结果:经菌液PCR、BamHI和EcoRI双酶切及序列分析后证实K-ras基因外显子1,4及侧翼序列已成功地克隆入pLXSN中。重组逆转录
其他文献
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食
Back to yield
目的:转化生长因子β1(TGFβ1)在肿瘤的生长、分化、细胞凋亡、细胞外间质形成、肿瘤血管形成及机体抗肿瘤免疫反应等方面发挥重要的调节作用。TGFβ1是正常上皮细胞生长抑制
儿童食品包装是针对特殊的消费群体的设计,需符合儿童的审美偏好。提出了将"仿生色彩设计"运用到儿童食品包装中的新理念,自然界中存在着很多生动有趣的色彩现象,并且对于儿童
目的探讨澳特斯治疗急性支气管炎咳嗽的效果。方法选择确诊的400例急性支气管炎,随机分成治疗组和对照组。两组均在控制感染的基础上,治疗组口服澳特斯,对照组口服急支糖浆,均不
新制度主义是一种制度研究的观点和方法论。职业院校教师企业实践意义重大,但现实状况却面临着一些问题。在新制度主义视野下研究职业院校教师企业实践制度存在许多优势,如制
【正】 为使所依据的材料具有可靠性、一致性,本文以1981年10月1日日本政府公布的《常用汉字表》中基本音节的汉字为研究对象。 日语的基本音节包括清音45个字母、浊音20个字
当前理财业务已成为金融机构重点业务.本文在对陕西省30家金融机构调查的基础上,对理财业务发展的特点和存在的问题进行了总结,并提出强化监测分析、规范信息披露、做好总量
采用联合国贸易数据库SITC编码5位数贸易数据,基于对称显示性比较优势指数、技术复杂度指数和出口产品单位价值,创新地对中国水产品对外贸易比较优势的动态变化进行逐一研究,
目的:通过相关分子标志物的检测探讨两种药物联合治疗缺血性心肌病患者心力衰竭的临床疗效。方法:缺血性心肌病心力衰竭患者60例平分为两组,对照组采用常规心力衰竭治疗,治疗组
食管癌相关基因1(Esophageal Cancer Related Gene 1,ECRG-1)是我室发现的一个新基因,其开放阅读框长1254bp,编码418个氨基酸。它在正常食管上皮组织中表达,肿瘤组织中缺如。体外