【摘 要】
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目的研究芍药苷在HK-2细胞缺氧复氧损伤中的作用及其对Keap1/Nrf2/HO-1信号通路的影响。方法培养人肾近曲小管上皮(HK-2)细胞至5-8代,选取生长状况良好的细胞,作为研究对象。用化学性缺氧剂氯化钴(COCL2)刺激HK-2细胞24h后,CCK-8测得细胞活力为50%左右时,氯化钴浓度为400μM。应用400μM氯化钴刺激细胞24h诱导缺氧状态,然后用新鲜培养基继续培养4h,构建缺氧/
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目的研究芍药苷在HK-2细胞缺氧复氧损伤中的作用及其对Keap1/Nrf2/HO-1信号通路的影响。方法培养人肾近曲小管上皮(HK-2)细胞至5-8代,选取生长状况良好的细胞,作为研究对象。用化学性缺氧剂氯化钴(COCL2)刺激HK-2细胞24h后,CCK-8测得细胞活力为50%左右时,氯化钴浓度为400μM。应用400μM氯化钴刺激细胞24h诱导缺氧状态,然后用新鲜培养基继续培养4h,构建缺氧/复氧模型。分别用50μM、100μM、200μM三种不同浓度的芍药苷预处理HK-2细胞4h,再建立缺氧/复氧模型。应用CCK-8法和DCFH-DA荧光探针法检测各组细胞活力和活性氧ROS水平,最终确定200μM为芍药苷最佳治疗浓度。将HK-2细胞分为空白组、模型组、芍药苷治疗组以及Nrf2抑制剂组。ROS水平的检测使用DCFH-DA荧光探针技术,SOD活力利用超氧化物歧化酶检测试剂盒检测,MDA水平于丙二醛检测试剂盒检测,western blot检测Bcl-2、HIF-1α、Bax、Nrf2、Keap1及HO-1的蛋白表达水平。以平均值±标准差作为数据的表示方式,统计软件为Graph Pad Prism 8,数据采用单因素方差分析方法进行统计学分析。当P值<0.05时,差异被视为有统计学意义。结果1.与空白组相比,细胞活力在缺氧复氧模型组明显减低,ROS及MDA水平上升,SOD活性下降,芍药苷预处理后改善了细胞活力,提高SOD活性,降低ROS及MDA水平。2.Western blot显示,缺氧复氧HK-2细胞的Bax及HIF-1α蛋白表达上调,Bcl-2表达则下调,而芍药苷治疗组的蛋白表达趋势与模型组相反。3.Western blot显示,模型组的Keap1蛋白表达下调,Nrf2及HO-1表达上调,芍药苷预处理后激活Nrf2/HO-1通路,进一步上调Nrf2及HO-1表达,下调Keap1蛋白表达。4.Western blot显示,与模型组相比,芍药苷治疗组核内的Nrf2蛋白表达和胞质的HO-1表达明显上调。5.与芍药苷治疗组相比,Nrf2抑制剂组的ROS及MDA水平升高,SOD活力下降。结论芍药苷可减少缺氧复氧HK-2细胞的ROS和MDA水平,改善SOD活性,减少凋亡,调节Keap1/Nrf2/HO-1信号通路,增强Nrf2的核转移并促进HO-1表达,从而减轻缺氧复氧损伤。
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