瘤胃源酵母菌的分离筛选及其对绵羊-亚急性瘤胃酸中毒的防治效果

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亚急性瘤胃酸中毒(SARA)是反刍动物养殖中最常见的一种营养代谢性疾病,给养殖业造成巨大损失。酵母菌具有能够维持瘤胃内p H,促进饲料纤维降解,预防酸中毒等优点,常被作为一种微生态制剂广泛应用于反刍动物养殖中。由于现用的酵母菌株主要分离自自然环境,其生存条件与瘤胃环境不一致,不能有效地在瘤胃内发挥作用。为获得对反刍动物更有应用价值,效果更好的酵母菌种,本研究以4头荷斯坦雄牛和4只杜泊羊×小尾寒羊杂交羊的瘤胃液为试验材料,麦芽汁琼脂培养基为基质,分离筛选乳酸利用能力强和生长速率快的瘤胃源酵母菌;运用体外发酵技术,研究在不同精粗比例的饲粮中,酵母菌对绵羊瘤胃体外发酵的影响;通过在正常饲粮基础上增加饲料精粗比构建绵羊SARA模型,研究建模过程中绵羊瘤胃液与血液相关参数的变化,了解SARA时机体的变化;通过给患有SARA的绵羊灌服酵母培养液,观察酵母培养液对SARA的治疗效果,以期为研究反刍动物微生态制剂,防治SARA提供理论依据。结果如下:1.从瘤胃液中通过分离筛选和18S r RNA鉴定,最终获得8株酵母菌,选取1株乳酸利用率较高、生长速率较快的酵母菌,即褶皱假丝酵母菌(Candida rugosa),编号为N09号酵母。2.采用体外模拟瘤胃发酵技术,测定该酵母对不同精粗比饲料(5:5、6:4、7:3)瘤胃发酵主要参数的影响。结果表明:随着日粮精粗比的提高,产气量呈降低趋势,干物质降解率和微生物蛋白浓度呈升高趋势;在9、12、28、36 h时,精粗比为6:4和7:3组p H显著高于5:5组(P<0.05);3组发酵液氨态氮浓度差异不显著(P>0.05);总挥发性脂肪酸、乙酸、丙酸和丁酸浓度随时间延长呈上升趋势,乙酸/丙酸呈下降趋势。3.随着饲粮精料比例的增加,瘤胃液p H显著降低(P<0.05),当p H持续低于5.6时且超过3 h,即成功构建绵羊SARA模型;发生SARA时,绵羊瘤胃液中乳酸浓度和组胺浓度均显著增加(P<0.05),血液中组胺浓度显著升高(P<0.05),炎症明显;钠离子和氯离子浓度显著升高(P<0.05),钙离子浓度降低,机体电解质代谢紊乱;AST浓度升高,机体肝功能发生损伤;GLU、尿素、TP、ALB、GLB浓度均有升高,但差异不显著(P>0.05),表明机体出现脱水现象。4.SARA绵羊灌服瘤胃源酵母培养液后,瘤胃内p H显著升高(P<0.05),乳酸浓度和组胺浓度显著降低(P<0.05);灌服后第10 d血液中乳酸浓度显著降低(P<0.05),p CO2浓度降低,HCO3-浓度升高,钠离子浓度和氯离子浓度降低,钙离子浓度显著升高(P<0.05),AST、GLU、尿素、TP、ALB、GLB浓度均有降低,但差异不显著(P>0.05),提示酵母培养液对绵羊SARA有缓解作用。5.不同饲料精粗比条件下发生SARA和灌服酵母培养液的绵羊瘤胃液样品在门水平的物种相对丰度和属水平的物种相对丰度差异均不显著(P>0.05);随日粮精粗比的升高,瘤胃内Observed species、Chao1、ACE和Shannon index呈降低趋势,灌服酵母培养液,瘤胃内Observed species、Chao1、ACE和Shannon index均有升高。
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