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血液中凝血和抗凝血、纤溶和抗纤溶系统保持动态平衡,共同维持血液的流动性,一旦平衡失调,可导致血管内凝血,形成血栓栓塞性疾病,或引起出血性疾病。目前国内外临床使用的治疗血栓栓塞性疾病药物主要包括抗凝血药物、抗血小板药和纤维蛋白溶解药。在这些药物中肽类(小于100个氨基酸)抗凝血药物,如水蛭素、比伐卢定以及可口服的小分子类肽药物(如希美加群)等,具有起效快、副作用较低等突出优点,是今后抗凝溶栓药的重点发展方向。新型的抗凝溶栓药物不仅可以从抗凝血酶途径发挥溶栓作用,而且对纤溶酶途径也有促进作用。本文研究了新型合成水蛭肽Hirulog-s在体外的纤溶酶促动力学和体内的溶栓效果,以及对纤维蛋白活性的影响,进而评价了Hirulog-s对纤溶系统的药理作用。第一章综述了凝血酶抑制剂在血栓栓塞性疾病中的作用机理和临床用药特点。凝血酶抑制剂按以凝血酶为靶点,用凝血酶抑制剂来抑制血栓的生成是临床治疗血栓的方法之一。凝血酶抑制剂按作用机制可分为间接凝血酶抑制剂和直接凝血酶抑制剂。间接凝血酶抑制剂如肝素、华法林等在治疗血栓形成过程有其应用价值,但存在一定局限性。而临床直接凝血酶抑制剂有优于肝素等抗凝药物的功效,同时也存在一定缺点,所以人们开始研究新的抗凝溶栓药物。近年来,运用先进的生物工程技术已成功开发了多种直接凝血酶抑制剂已被用于临床,治疗效果优于传统抗凝药物。而新型的凝血酶抑制剂还需要更加深度地研究其作用机理和临床效果。第二章构筑单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(pro-uPA)和纤溶酶原(plg)相互活化反应的体外纤溶体系,添加Hirulog-s成反应体系不同浓度,比较pro-uPA和plg相互活化反应体系中纤溶酶(plm)作用于pro-uPA反应的酶促反应动力学常数(Km,kcat),分析Hirulog-s对plm作用于pro-uPA反应的催化速率及亲和性。纤溶活性作用检测采用底物酶促反应法,酶促反应动力学常数的测定基于单链尿激酶型纤溶酶原激活剂激活纤溶酶原的反应。在plm作用于pro-uPA的反应体系中,30μmol·L-1 Hirulog-s与对照相比kcat值增大了3.1倍,Km值减小了1.6倍,表明Hirulog-s可以显著提高plm的最大催化速率同时增强亲和性。30μmol·L-1 Hirulog-s与对照相比kcat/Km值增大了4.75倍,表明Hirulog-s明显提高了plm的催化效率。通过活性对比表明Hirulog-s的纤溶活性强于水蛭肽比伐卢定(Hirulog-1)。第三章研究新型合成水蛭肽Hirulog-s体内溶血栓药效作用。基于体外纤溶实验来进一步评价Hirulog-s的体内溶血栓作用。通过建立FITC-肺血栓大鼠模型,以生理盐水组作为对照组,pro-uPA组作为阳性对照组,Hirulog-s分高、中、低不同剂量组进行处理,以及与Hirulog-1高、中、低不同剂量组进行对比,给药12h后检测血浆荧光值变化情况并进行肺切片组织形态学观察,评价Hirulog-s高、中、低不同剂量的溶栓效果。结果表明在急性大鼠肺血栓栓塞模型中,注射1.6mg/kg·bw的Hirulog-s后的肺组织切片图显示肺泡结构完整,肺泡壁均匀,残存着肺血栓溶解后的痕迹效果最好,与阳性对照pro-uPA类似。而Hirulog-1的溶栓效果通过肺组织切片观察不明显,效果不如Hirulog-s。通过检测大鼠血浆中荧光强度值发现1.6 mg/kg·bw的Hirulog-s在肺血栓大鼠血浆中荧光强度值相比对照组表现极显著差异,其在体内的纤维蛋白溶解作用与pro-uPA相当。第四章研究新型合成水蛭肽Hirulog-s对大鼠纤维蛋白活性的影响。研究对象Wistar大鼠通过尾静脉注射高、中、低不同浓度的Hirulog-s,同样以pro-uPA作为阳性对照,采用加钙法检测血液优球蛋白溶解时间,ELISA试剂盒检测血液中纤维蛋白原和纤维蛋白原降解产物的含量。数据分析统计后表明处理120min后优球蛋白溶解时间被缩短了32s-40s,Hirulog-s处理组与生理盐水对照组之间具有显著差别(p<0.05),表明Hirulog-s提高了大鼠血浆中的纤溶活性。在添加Hirulog-s的剂量分别为0.4、0.8、1.6mg/kg·bw与对照组相比在120min后纤维蛋白原含量出现显著差异,而纤维蛋白降解产物含量没有出现显著差异,表明Hirulog-s给药后,血液中的纤维蛋白原的下降不是因为纤溶酶的过度溶解,而纤维蛋白原的下降可能会导致部分出血。