共振瑞利散射和荧光法在测定多糖、维生素和利尿药中的新应用研究

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本文主要研究硫酸软骨素、维生素B类和托拉塞米等药物与硫酸耐尔蓝、12-钨磷酸和二卤代荧光素的相互作用,以此建立了测定硫酸软骨素和维生素B类的共振瑞利散射法和测定托拉塞米的荧光光谱法,并将方法应用于实际样品的检测。研究内容如下:1.硫酸耐尔蓝双波长共振瑞利散射法测定硫酸软骨素在pH3.0-4.0的Britton-Robinson(BR)缓冲介质中,硫酸软骨素(CS)与硫酸耐尔蓝反应形成离子缔合物,引起共振瑞利散射(RRS).二级散射(SOS)和倍频散射(FDS)的强度显著增大,其最大RRS波长为303nm和362nm,最大SOS和FDS波长分别为588nm和350nm。在实验最佳条件下,三种散射增强(△IRRS、△ISOS和△IFDS)均在一定范围内与CS的浓度成正比,方法具有高灵敏度,对于CS的检出限分别为3.4ng/mL(RRS,303nm)、2.8ng/mL(RRS,362nm)和7.1ng/mL(SOS和FDS),可用于痕量CS的测定。研究了反应体系的RRS、SOS和FDS光谱,适宜的反应条件和影响因素,并以RRS法为例考查了共存物质的影响,方法具有良好的选择性,用于滴眼液中CS的测定,回收率在99.4%-104.6%,RSD在0.4%-0.8%,结果满意。本文还通过原子力显微镜探讨了离子缔合物的形成和共振瑞利散射增强的原因。2.维生素B12与12-钨磷酸相互作用的双波长共振瑞利散射光谱及其分析应用本研究发展了一种双波长共振瑞利散射测定维生素B12的新方法。在pH0-1.5的HCl介质中,维生素B12(VB12)与12-钨磷酸(TP)形成3:1的离子缔合物,引起双波长共振瑞利散射(DWO-RRS)、二级散射(SOS)和倍频散射(FDS)光谱显著增强,其最大散射波长分别位于330nm(RRS)、370nm(RRS)、608nm(SOS)和386nm(FDS)。在一定范围内,三种散射增强(AIRRS、△ISOS和AIFDS)均与维生素B12浓度成线性关系。方法具有较高的灵敏度,RRS, SOS和FDS法对VB12的检出限(3a)在2.0~7.6ng/mL之间。研究了适宜的反应条件和共存物质的影响,表明方法具有良好的选择性。据此,提出了简便快速、准确、高灵敏测定痕量维生素B12的光散射新方法,适用于片剂和尿样中维生素B12的测定。文中还对反应机理和散射光谱增强的原因进行了讨论。3.12-钨磷酸共振瑞利散射光谱法测定维生素Bl及其分析应用在盐酸介质中,12-钨磷酸(TP)与维生素B1(VB1)反应形成1:3的离子缔合物,导致溶液的共振瑞利散射(RRS)显著增强,并产生新的散射光谱。最大散射峰位于335nm,在0.25~1.75μg/mL范围内,散射强度与VB1浓度成线性关系,据此建立测定痕量VB1的光散射新方法。本法具有较高的灵敏度和良好的选择性,其检出限(3G)为0.94ng/mL。适用于尿样和维生素B1片剂中VB1的测定,回收率在97.3%~99.0%之间,RSD在1.10%~3.4%之间,结果满意。本文研究了适宜反应条件和影响因素,并对RRS光谱特征和散射增强机制进行了讨论。4.二卤代荧光素荧光猝灭法测定托拉塞米在弱酸性缓冲溶液中,托拉塞米(TOR)可与二氯荧光素(DCF)、二溴荧光素(DBF)和二碘荧光素(DIF)等二卤代荧光素反应形成复合物,从而引起二卤代荧光素荧光的猝灭,最大猝灭波长分别位于532nm(DCF)、535nm(DBF)和554nm(DIF)o荧光猝灭程度在一定范围内与托拉塞米的浓度呈线性关系,可用于托拉塞米的测定。该方法有较高的灵敏度,检出限(3σ)分别为4.8ng/mL (TOR-DCF)、9.8ng/mL (TOR-DBF)和35.1ng/mL (TOR-DIF).研究了适宜的反应条件和影响因素,以TOR-DCF体系为例,考察了共存物质的影响,表明方法有良好的选择性。文中还讨论了复合物的组成、结合力和结合模式。通过温度的影响以及Stern-Volmer方程,判断该反应为静态猝灭过程。以二氯荧光素为探针采用荧光猝灭法测定了人尿样及托拉塞米片中TOR的含量,结果令人满意。
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