论文部分内容阅读
背景：炎症在心血管疾病(如：冠状动脉粥样硬化、高血压等)的发生和发展中起着重要的作用。高血压,尤其是盐敏感性高血压,是造成终末期肾脏病的主要疾病之一。大量研究显示,以单核／巨噬细胞浸润为主的炎性反应在盐敏感性高血压所导致的肾脏损害中发挥着重要作用。雷公藤多苷(Tripterygium wilfordii polyglycoside,TWP)作为中药雷公藤的主要制剂形式,具有抗炎和免疫抑制作用。基于雷公藤多苷的抗炎作用,我们推测雷公藤多苷可能通过抑制单核／巨噬细胞功能减轻和缓解盐敏感性高血压所致的肾脏损害,从而达到保护。肾脏的目的。目的：本实验在醋酸脱氧皮质酮(desoxycorticosterone acetate,DOCA)-盐高血压动物模型上,阐明雷公藤多苷对盐敏感性高血压所致肾脏损害的保护作用,以及雷公藤多苷对以单核／巨噬细胞浸润为主的炎症反应的抑制作用,从而揭示雷公藤多苷减轻盐敏感性高血压所致肾脏损害的机制。方法：清洁级雄性C57BL/6小鼠(8-9周龄)经过1周适应性饲养后,分为假手术组、醋酸脱氧皮质酮(desoxycorticosterone acetate, DOCA)-盐模型组、DOCA-盐雷公藤多苷组,每组各10只小鼠。具体方法如下：小鼠给予皮下注射甲苯噻嗪(4mg/kg)和氯胺酮(80mg/kg)麻醉,背侧切口行常规左肾切除术,在肩胛骨间皮下植入DOCA片(24m∥10g)。术后给予含1%NaCl和0.2%KCl的蒸馏水。假手术组小鼠仅摘除左侧肾脏,但不植入DOCA片,给予正常饮用水。DOCA-盐模型组小鼠给予蒸馏水灌胃(2ml/kg), DOCA-盐雷公藤多苷组小鼠给予雷公藤多苷蒸馏水混悬液灌胃(12mg/kg/day),术后所有小鼠连续3天肌肉注射青霉素钠盐,3组小鼠均每天灌胃1次,持续给药5周,并于术前及术后各周测定清醒小鼠尾动脉收缩压。实验5周后,收集尿液、血浆及肾脏,进行如下检测：1.测定小鼠的尿量、肾脏重量、肌酐清除率以及尿蛋白；2.用特异性试剂盒测定尿8-异构前列腺素含量；3.通过PAS (periodic acid-schiff stain)染色和Masson染色,分别确定。肾小球硬化程度和。肾小管间质损害程度；4.通过羟脯氨酸法测定肾胶原蛋白含量；5.通过F4/80免疫组化染色法确定肾脏单核／巨噬细胞浸润数量。结果：1.各组小鼠尾动脉收缩压测定结果术前3组小鼠之间基础血压差异无统计学意义(P>0.05)。术后假手术组小鼠动脉收缩压无明显变化,术后第1周DOCA-盐模型组和DOCA-盐雷公多苷组小鼠血压较假手术组显著升高(P<0.05),并且于术后第3、4、5周达高峰。DOCA-盐模型组和DOCA-盐雷公藤多苷组小鼠之间的动脉收缩压差异无统计学意义。2.各组小鼠体重及肾脏相关参数测定结果3组小鼠体重之间差异无统计学意义(P>0.05)。与假手术组比较,DOCA-盐模型组和DOCA-盐雷公藤多苷组小鼠的肾脏重量和24h尿量明显增加(P<0.05),而DOCA-盐模型组和DOCA-盐雷公藤多苷组之间无明显差异(P>0.05)。另外,与假手术组相比,DOCA-盐模型组小鼠24 h尿白蛋白排泄量显著增加(P<0.05),而肌酐清除率明显下降(P<0.05),雷公藤多苷可显著抑制上述变化(P<0.05)。3.尿8-异构前列腺素测定结果针对尿8-异构前列腺素,DOCA-盐模型组小鼠较假手术组小鼠明显增加(P<0.05),雷公藤多苷可抑制尿8-异构前列腺素增加。4.肾脏病理学测定结果与假手术组相比,DOCA-盐模型组小鼠肾小球纤维样硬化明显可见,其肾小球纤维样硬化指数显著升高(P<0.05)。同时,DOCA-盐模型组小鼠肾小管间质损伤程度较假手术组加重明显(P<0.05),而雷公藤多苷明显抑制上述病理变化(P<0.05),从而阻止盐敏感性高血压所导致的肾脏损害。5.肾脏胶原蛋白含量测定结果针对肾脏胶原蛋白含量,DOCA-盐模型组小鼠较假手术组小鼠明显增加(P<0.05),雷公藤多苷可明显抑制其增加(P<0.05)。6.肾脏单核／巨噬细胞定量分析结果与假手术组比较,F4/80阳性的单核／巨噬细胞数量在DOCA-盐模型组小鼠。肾脏中明显增加(P<0.05),雷公藤多苷处理后可明显抑制F4/80阳性的单核／巨噬细胞数量的升高(P<0.05),表明雷公藤多苷可能通过抑制单核／巨噬细胞功能减轻和缓解盐敏感性高血压所致的肾脏损害。结论：1.在DOCA-盐高血压动物模型上,雷公藤多苷明显抑制该病理过程所诱发的肾脏损害,该结果证实雷公多苷对盐敏感性高血压所导致的肾脏损害具有保护作用。2.在DOCA-盐高血压动物模型上,雷公藤多苷明显抑制肾内单核／巨噬细胞浸润,该实验结果提示雷公藤多苷可能通过抑制单核／巨噬细胞浸润为主的炎症反应减轻和缓解盐敏感性高血压所致的肾脏损害。