长链非编码RNA RP11-335I12.2在胃癌组织中的表达分析及其生物学功能的初步研究

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【目的】根据本课题组前期芯片测定的结果,选择胃癌中异常表达的长链非编码RNA RP11-335I12.2进行研究:通过实时荧光定量PCR验证其在扩大样本量的胃癌组织中的表达水平;观察LncRNA RP11-335I12.2在胃癌肿瘤组织中异常表达与患者临床病理因素的关系;初步研究LncRNA RP11-335I12.2对于胃癌细胞生物学功能的影响,为胃癌的分子诊断和临床诊治提供新的靶点和相应的理论和实验依据。【方法】1)根据本课题组前期芯片测定的结果初步锁定显著下调表达的LncRNA RP11-335I12.2;收集2014年3月至2016年3月间福州总医院普外科收治并接受手术治疗的89例胃癌患者胃癌组织及配对癌旁正常组织,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对LncRNA RP11-335I12.2在上述89例样本中的表达进行验证;2)收集上述89例胃癌患者临床病理资料并结合相应胃癌组织中LncRNA RP11-335I12.2的表达量,分析其与临床病理因素的关系;3)通过转染lncRNA RP11-335I12.2表达质粒载体后应用G418筛选,建立lncRNA RP11-335I12.2稳定过表达的胃癌细胞系,并通过细胞增殖、迁移等细胞功能实验,研究胃癌细胞过表达lncRNA RP11-335I12.2后对其生物学功能的影响。【结果】1)LncRNA RP11-335I12.2在胃癌组织中的表达量显著低于配对的癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.001)。89例胃癌组织共有64例呈下调表达,下调表达率达71.9%;2)胃癌组织中LncRNA RP11-335I12.2的表达水平与肿瘤直径、浸润深度、淋巴转移及神经侵犯密切相关(P<0.05)。3)在5株胃癌细胞系中选择lncRNA RP11-335I12.2表达量最低的SGC-7901和BCG-823细胞系,通过转染lncRNA RP11-335I12.2过表达的质粒后G418筛选,成功建立稳定过表达lncRNA RP11-335I12.2的胃癌细胞株。qRT-PCR验证过表达效率结果为:在过表达的SGC-7901和BCG-823细胞系中lncRNA RP11-335I12.2的表达量分别较转染空载体的对照组细胞上调476倍和1285倍。CCK-8细胞增殖实验显示:过表达lncRNA RP11-335I12.2的SGC-7901和BCG-823细胞增殖能力显著下降,与空载体稳定转染细胞株对比,P均<0.05。平板克隆形成实验结果显示:过表达lncRNA RP11-335I12.2的SGC-7901和BCG-823细胞克隆形成率显著低于空载质粒稳定转染对照组细胞,P均<0.05。Transwell迁移实验结果显示:过表达lncRNA RP11-335I12.2的SGC-7901和BCG-823胃癌细胞穿透小室的细胞数量较对照组显著减少,P均<0.05。【结论】1)LncRNA RP11-335I12.2在胃癌组织中的表达相对于癌旁组织显著降低。2)LncRNA RP11-335I12.2在胃癌肿瘤组织中的表达水平与肿瘤直径、浸润深度、淋巴转移、神经侵犯密切相关。3)LncRNA RP11-335I12.2过表达可抑制胃癌细胞增殖;同时其过表达对于胃癌细胞迁移具有抑制功能。上述胃癌组织中的长链非编码RP11-335I12.2的初步研究可为胃癌发病机制和临床治疗研究提供新思路,lncRNA RP11-335I12.2可能成为胃癌分子靶向治疗的潜在靶点。
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