大丽轮枝菌是诱发寄主植物黄化乃至枯萎的病原真菌，严重影响了许多农作物的产量与品质。研究发现大丽轮枝菌分泌的糖蛋白VdNEP在侵染植物的过程中具激发子和毒素的双重作用。然而目前大丽轮枝菌的毒素蛋白VdNEP在植物细胞的定位及发挥作用的机制尚不清楚。研究大丽轮枝菌与植物相互作用的分子机制，可为防治黄萎病提供行之有效的理论基础和新策略。本论文以大丽轮枝菌的毒素蛋白VdNEP作为诱饵蛋白筛选拟南芥cDNA文库，以期能够筛选到拟南芥体内与VdNEP有相互作用的蛋白。　　首先将VdNEP构建到BD载体上得到表达BD-VdNEP融合蛋白的重组质粒并验证了VdNEP对酵母AHl09菌株无毒性且不能激活报告基因的表达，说明酵母双杂交系统可适用于诱饵蛋白 VdNEP。接下来用 VdNEP作为诱饵同拟南芥cDNA的酵母文库进行杂交，利用营养缺陷型培养基和X-α-gal筛选阳性重组子。提取阳性重组子中的文库质粒并测序，将测序得到的文库序列于拟南芥数据库tair中Blast比对，确定文库中插入基因的蛋白属性。最后选定3个筛选的文库蛋白进行深入研究，分别为R2蛋白、M2蛋白和PDI蛋白。　　反向酵母双杂交实验将VdNEP、R2、M2和PDI基因序列构建成重组质粒AD-VdNEP、BD-R2/M2/PDI，共转化AD-VdNEP/BD-R2、AD-VdNEP/BD-M2、AD-VdNEP/BD-PDI。实验结果表明R2、M2和PDI确实与VdNEP在酵母体内存在相互作用。　　去掉R2、M2和PDI的信号肽和跨膜序列，构建到表达载体pGEX6p-2上。VdNEP构建到表达载体 pET30上。表达质粒转入大肠杆菌，IPTG诱导表达并进行SDS-PAGE电泳分析，M2蛋白未检测到表达，R2蛋白主要以包涵体形式存在，PDI蛋白易降解。所以GST融合蛋白体外pull-down实验验证蛋白间体外互作的实验不能顺利开展。　　BiFC实验将R2、M2及PDI蛋白与YFP C端部分融合表达，将VdNEP与YFP N端部分融合表达。含不同重组质粒的农杆菌混合后注射到烟草的下表皮细胞，培养2-3天后取样在荧光共聚焦显微镜检测荧光信号。研究发现 VdNEP与R2、M2及PDI三者互作的强度顺序为：M2、R2、PDI。为了进一步研究互作蛋白的互作机制，我已构建了 VdNEP、R2、M2蛋白在植株体内过表达重组质粒及诱导R2、M2基因沉默的重组质粒。后期将得到VdNEP、R2、M2蛋白的过表达植株，以及 R2、M2蛋白的敲除植株，进而可从植株的表型水平分析VdNEP与R2、M2的功能机制。