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许多报道显示人类的多种恶性肿瘤，如胃癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌等，能比它们的正常组织合成更多的前列腺素(PA)。环氧合酶(COX)是花生四烯酸(AA)转化成前列腺素代谢中的限速酶，可分为在许多正常组织恒定表达的原生性COX-1和在炎症组织中表达增强的诱生性COX-2。最近，多项研究表明COX-2的过表达与多种恶性肿瘤的发生发展有关。80年代以来，西方数项大型流行病学调查发现，长期使用非甾体类抗炎药(NASAID)治疗的类风湿关节炎患者，其结肠癌等各种恶性肿瘤的发生率明显下降。NASAID抑制肿瘤的机制在于抑制它的靶分子COX-2。本研究通过检测COX-2的表达与胃癌各项临床病理特征及预后之间的关系，旨在探讨COX-2在胃癌发生和转移中的作用。 材料与方法一、研究对象1．RT-PCR检测标本来源：我院2001．11—2002．10手术切除，经病 浙江大学阶t：学位论文一中文摘要理证实的47例胃癌标本，及相对应的阴性切缘。 2．免疫组化标本来源：我院 1984—1993年手术切除，经病理证实的 195例胃癌标本。并且根据临床和病理资料，对于癌肿的组织学类型，肿瘤淋巴管侵犯，静脉侵犯，肝转移，淋巴结转移，腹膜转移等各项资 料进行分析。 二、RT－PCR捡测： 1．引 物 序 列：e－acti。上 游 引 物 为5’－TCGTG ATATGGACTCCGGT0AC－3’，下 游 引 物 为5’．TCGTGGATGCCACAGGACTC－3’。COX－2 上游引物为： 5’．TGAAACCCACTCCAAACACAG－3’下 游 引 物 为： 5’－TCATCAGGCACAGGAGGAAG－3’。 2．实验方法：将 100mg ＄存组织在液氮中碾磨成粉末，加入 lml TRIzol试剂提取组织总 RNA。取 RNA Zug用于逆转录，PCR反 应条件为：94度预变性4。in，然后32个循环的扩增，最后72度延 伸10min．每个循环包括94度变性45s，57度退火45s。72度延伸60s。 PCR产物经1．5％琼脂糖电泳，通过凝胶成像系统读取目的电泳条带的 密度扫描值，将COX－2条带与 B－actln条带的比值作为 COX－2的表达 相对量。－二、兔疫组化检测1．免疫组化法检测COX－2在肖癌个的表达：采用ENVISION（两步法）， COX－2 r克隆抗体（抗体稀释比 1：200） 37℃60mlfl：加入 H肝 f，i记 的羊抗鼠屹G（Envision二抗卜 37aC孵育 60min DAB显色。 浙江大学硕上学位论文一中义摘要2免疫组化阳性结果判定标准：阳性细胞为呈棕色的阳性反应产物。阳 性细胞数小于 10％为组织表达阴性，大于 10％为阳性。四、统计学方法 RTPCR检测结果的数据以平均数土标准差表示（三 is）表示，均数 问比较用ilcoxon检验。使用例联表分析临床病理资料与免疫组化的 结果，x“检验差异的显著性；用Kaplan－Meter法分析患者生存率，不 同组别间的生存率差别用时序检验＊ rank lest人血转移的多种危险 因素用多分类反应变量的LOgistiC口归分析。P＜0刀5定为统计学差异 有显著性。 结果 1．COX－ZmRNA在胃癌及相应切缘5「癌组织中的表达 47例胃癌组织中均有不同密度的COX－2条带出现，胃癌组织中 COX2＜RNA的表达明显高于正常组织…功．00人浸润深度为pTI丁 胃癌组织的表达量为0．75 士 0．43，浸润深度为T3＊4胃癌组织的表 达量为 1刁 4士 0．67两者之问的差别有显著性…二 0．of人 2．COX－2免疫组化阳性与胃癌组织临床病理特征的关系 C＊＊－2蛋白在胃癌癌细胞胞浆和核膜部位染色阳，仕，胃癌组织深层浸 润的癌细胞常出现COX－2 ill白染色强阳性。分化型胃癌COX－2的表 达率显著高于未分化型胃癌的表达率。浸润深度为叮，pT3及pT4的 胃癌＊0义2的表达率，三者之问的差别无显著性…－0．船3入伴淋巴 管侵犯的胃癌COX－2的表达率与无淋巴管侵犯的胃癌COX－2的表达 3 浙江人学颀1：学位论文一中文摘要率两者的差异无显著性中－0二63 ）o伴静脉侵犯的胃癌 COX习的表达率与无静脉侵犯的胃癌COX1的表达率两者的差异显著…－0刀3人伴淋巴结转移的胃癌COX－2的表达率明显高于淋巴结转移阴性的胃癌COX《的表达率巾＝0刀02人伴肝脏转移的胃癌COX工的表达率明显高于肝脏转移阴性的胃癌 COX工的表达率（P－0刀门人发生血转移的胃癌COX－2的表达率明显高于血转移阴性的胃癌COX－2的表达率中－0．008人发生腹膜转移的胃癌COX2的表达率与腹膜转移阴性的胃癌 COX《的表达率两者的差异无显著性（P－0．388入 UICC临床病理分期1，11，Ill，IV期胃癌COX－2的表达率，四组之间的差异无显著性（P一0．41）。3多元回归分析胃癌血转移的独立危险因素。 为了明确 195例胃癌发生血转移的独立危险回素进行多元回归分析，首先对血转移和可能的危险因素（组织类型、浸润深度、静脉侵犯、淋巴结转移、COX卫表达阳性）之问分别进行单因素分析，对有统