背景原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)在新的癌症诊断中占据第六位,也是全球癌症死亡的第三个最常见的原因。对于肝癌目前的治疗效果还远远不能令人满意,其五年存活率大约只有10%。肝移植在目前被认为是其唯一的治愈性疗法,然而肝癌晚期和不能切除的肝细胞癌患者占了80%以上,而这些患者又是不适合进行肝脏移植或手术切除的。常见的一些化疗方案,如使用常规的具有细胞毒性的药物,例如阿霉素,顺铂和氟尿嘧啶的化疗,这也是一种治疗手段,特别是针对晚期肿瘤患者的临床治疗。然而因为严重的毒性反应和高复发率,这些治疗的存活时间也仅仅只能维持在大约六个月左右。因此,研究探索HCC新的检测或者治疗手段就显得尤为必要和迫切。对于肿瘤发生发展过程中的生物活动一直是诸多学者研究的热点,肿瘤抑制基因和癌基因的活动也已经证实在肿瘤发生中的启动作用,还有不少分子集团、分子通路以及转录蛋白也起到十分重要的作用。脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)是1996年Ohta[1]等研究人员提出的一个新抑癌基因,该基因存在于绝大多数的正常器官组织中,跨越位点FRA3B,位于染色体的3q14.2区域,其高度同源于组氨酸三联体蛋白,因此被定义为FHIT,其通过诱导细胞凋亡,阻滞细胞的生长周期来发挥抑制肿瘤增殖的作用。但在人类的多种恶性肿瘤中(膀胱癌、胃癌、肺癌、食管癌、结肠癌等)呈现出杂合缺失,转录差错,从而引起FHIT蛋白的表达降低甚至缺失,最终导致其抑癌作用降低甚至丧失。另外近年来新发现的一种多肿瘤抑制的基因(multiple tumor suppressor,MTS1),即为P16基因,由P16基因所表达的大约16KD的蛋白质分子被命名为P16蛋白,CDK(cyclin-dependentkinase,CDK)的活性功能是细胞进入生长周期的前提条件,而细胞周期蛋白(cyclin)一定要和CDK发生结合,而结合所形成的cyclin复合体才可以活化,Rb基因的表达产物P110Rb蛋白磷酸化依赖于cyclin复合体,活化后的Rb蛋白能够使得细胞进入G 1-S期的生长周期,而在此过程中P16蛋白作为始动因素,其作用是抑制CDK的生物活性[2-4]。一旦P16基因因缺失、甲基化或者发生基因突变而不能表达P16蛋白时,细胞内竞争性结合CDK4的能力就会下降,对于细胞有丝分裂活动就不能进行有效地阻断,这样会导致CDK4和细胞周期蛋白的结合增多,从而使得有丝分裂活动在细胞内变得活跃,最终演变为细胞的生长活动失去控制。有报道提出恶性肿瘤的组织学分级可能与P16基因的表达不存在明显的因果关系,而与肿瘤的淋巴结转移和TNM分期有关,由此可能提示P16蛋白可能是预测肝癌患者预后的一项重要指标[5]。因此FHIT、P16蛋白作为肝癌发生过程中的一个靶点,对其诊断,治疗及预后都有重要价值。本实验采用免疫组化技术对74例肝癌标本进行检测,目的在于了解FHIT和P16蛋白在肝癌组织中的表达情况,结合临床检查指标,探讨这两个指标在肝癌发生中的作用及其相关性,阐述FHIT、P16在HCC临床诊断和发生发展过程中的价值。目的研究FHIT和P16两种因子在肝癌发生发展过程中的意义及二者间所存在的相关性,为肝癌临床药物治疗提供新的理论基础,也为患者早期个体化治疗、靶向治疗提供新的思路和方法。方法收集郑州大学第一附属医院2009年5月至2011年7月的74例进行手术治疗的肝癌患者病理标本、临床资料。其中女性患者23例,年龄29-77岁,平均年龄50.43±3.24岁;男性患者51例,年龄26-73岁,平均年龄47.18±2.36岁。对于我们所收集病例的选择条件为:1.均未在手术前进行其他任何形式的放、化疗治疗;2.对于所有肝癌患者的病理学诊断结果均有两位病理科副高级职称医务人员共同证实;3临床资料较为完备。我们采用SP(streptavidin peroxdase conjugated method)法检测远癌组织、癌旁组织和肝癌组织中FHIT和P16蛋白的表达,采用Biosens Digital Imaging System v1.6分析图像系统定量分析所得结果,用平均灰度值(average density)表示免疫组化结果的染色强度。统计分析FHIT、P16蛋白与所收集临床指标及此二者表达的相关性和意义。结果1.FHIT在组织中的表达:三组组织中FHIT的表达依次降低,远癌组呈强阳性,癌旁组织和癌组织的表达均有缺失存在,且远癌肝组织组>癌旁组>肝癌组,两两比较后,差异具有统计学意义(P<0.01)。2.P16在组织中的表达:P16在三组组织中表达依次降低,远癌组呈强阳性,癌旁组织和癌组织的表达均有缺失存在,且远癌肝组织组>癌旁组>肝癌组,两两比较后,差异具有统计学意义(P<0.01)。3.FHIT和P16在三组组织中的相关性表达分别为:(1)癌组织中rs=0.572、P=0.004;(2)癌旁组织中rs=0.495、P=0.007;(3)远癌组织中rs=0.309、P=0.017。三组的相关性分析中P值均<0.05,rs也均为正数,因此在三组中FHIT和P16的表达均存在相关性,且呈低到中度正相关。4.FHIT的表达与年龄、性别和肝癌大小无关,与肝癌的TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况及门静脉癌栓是否形成有关;P16的表达与性别、年龄、TNM分期、淋巴结转移情况、和门静脉癌栓是否形成无关,与肝癌的大小、分化程度有关。结论1.FHIT与P16基因作为新的抑癌基因在肝癌的发生过程中抑制肝癌的增殖和侵袭性生长,且二者之间呈现正相关。2.FHIT和P16蛋白检测可成为肝癌临床检测新的指标,可能成为未来肝癌诊断、治疗新的方法和依据。