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传统中医药在恶性肿瘤的治疗方面具有重要的地位。采 用来自天然的抗肿瘤中草药治疗肿瘤，具有疗效确切，毒副 作用小的特点，是晚期肿瘤的主要治疗手段，也是其他抗肿 瘤治疗措施的有益补充。本实验的目的是探讨中药蜂房的体 外抗肿瘤作用。材料和方法：1、人肝癌细胞SMMC-7721的 培养：于含10%胎牛血清(FCS)、100U/ml青霉素、链霉素 的RPMI640培养液中，在37℃、5%CO2、饱和湿度条件下， 于CO2培养箱中进行培养。2、MTT比色试验：选择在对数 生长期生长良好的细胞，制成单细胞悬液，接种细胞于96 孔培养板中。培养24小时后，药物组：以4个稀释度1：40， 1：80，1：160，1：320将蜂房水提液加入培养液，对照组 加入等体积的无菌蒸馏水，于加药后第48小时、72小时加 入MTT检测；3、生长曲线法：取1×104/ml的单细胞悬液， 每孔lml接种在24孔培养板中。药物组按1：80稀释度加 入蜂房水提液，对照组加等量灭菌蒸馏水，绘制细胞生长曲 线；4、集落形成法：单细胞悬液用RPMI 1640完全培养基 稀释成每毫升500个细胞，每孔2ml接种至6孔培养板，药 物组每孔各加蜂房水提液20μ1，对照组加灭菌蒸馏水20μ1， 静置培养8天，计数集落；5、细胞周期分析：将细胞悬液 接种于50cm2培养瓶中，每瓶5ml，药物组，培养液中加入 蜂房水提液60ul；对照组，培养液中加入等体积灭菌蒸馏水。 作用24小时、48小时，DNA染色后流式细胞仪检测，用ModFit 软件分析；6、凋亡检测：将细胞悬液接种至50cm2培养瓶 中，106个细胞/瓶，培养24小时后，更换培养液，药物组： 每瓶培养液5ml中加入露蜂房水提液60ul；对照组加入等量 3 灭菌蒸馏水。加药后于24．J’时、48．J’时按Annexin V仔I试 剂盒操作说明流式细胞仪进行检测。采用CellQuest功能软 件进行分析。结果：l、MTT法测定蜂房水提液明显抑制肝 癌细胞的生长，作用48小时，l：40的药物稀释浓度，细胞 生长抑制率为85．4％o＜o．01人 作用72 小时，1：4O 的药 物浓度，抑制率达 97．3％…＜0刀 1）；并存在效应－剂量、效应 －时间依赖关系；2、生长曲线显示药物组细胞生长缓慢，表 现为低平型曲线；3、集落形成实验结果显示药物组肝癌细 胞集落形成明显受抑，给药组集落形成率为 18石％士 2．42％， 对照组集落形成率为58．6％士15．0儿HO．0102，差异显著； 4、细胞周期分析结果：药物作用 48小时后，GO七 l期细胞 占细胞总数的 85．71％，高于对照组的 70．96％，P＜0．of；S期 的细胞占总数的 门．61％，低于对照组17．92％，P＜0．01；GZ－ M 期 的细胞 占细胞总数的2．68％，低于对照组 门．09％，P＜0．of；5、凋亡检测结果：对照组48 J时后，凋 亡率为2．09％士0．79趴 药物处理后48小时，凋亡率为10．51 士0．53（P＜0．05），中期凋亡率为 4．96士口．15，P＜0．01。结 论：蜂房水提液作用于肝癌细胞S删C｛721的S期，阻止细 胞进入GZ仇期，并诱导细胞凋亡，抑制体外培养的人肝癌 细胞的增殖。