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第一部分血管性痴呆大鼠模型的制备【目的】探讨制备理想的血管性痴呆(VD)动物模型方法,为研究VD提供理想的动物模型。【方法】将通过筛选的大鼠随机分为假手术组与模型组。假手术组仅切开颈部皮肤,不结扎颈总动脉;模型组采用间隔3天先后分别结扎双侧颈总动脉的方法制备VD大鼠模型,造模术后4周用Morris水迷宫对两组大鼠进行行为学检测。【结果】造模术后4周,模型组大鼠的成活率52.17%,成模率91.43%。行为学检测结果表明,血管性痴呆模型大鼠有明显的学习记忆障碍。【结论】采用改良后的双侧颈总动脉结扎法制备VD大鼠模型,具有高成模率、较高成活率、高重复性、痴呆症状稳定等优点,可以为VD的基础研究提供理想的动物模型。第二部分大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定【目的】体外培养符合实验要求的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)并进行鉴定,为进行细胞移植提供一定数量且功能稳定的种子细胞。【方法】无菌条件下取幼年雄性SD大鼠的股骨,采用全骨髓培养结合细胞贴壁法分离纯化BMSCs。待细胞生长铺满塑料瓶底80%-90%左右时,用2.5g/L胰蛋白酶控制消化120S后,按1:2进行扩增传代。倒置相差显微镜下观察原代及传代后的细胞的形态。通过流式细胞仪检测细胞表面标记物及向成骨细胞分化诱导后行碱性磷酸酶组织化学染色与茜素红S染色对扩增后的BMSCs进行直接、间接鉴定。【结果】大鼠BMSCs在体外可以分离培养扩增,分离培养的BMSCs形态呈长梭形,为贴壁生长的成纤维样细胞,扩增传代后的细胞形态趋于均一。经流式细胞仪检测细胞表面标记CD44和CD90阳性率分别为89.4%和99.2%,而CD34的阳性率仅为1.82%,诱导BMSCs能分化为成骨细胞,碱性磷酸酶染色阳性,茜素红S染色可见钙结节。【结论】全骨髓培养结合细胞贴壁法可以成功体外培养大鼠BMSCs。培养的BMSCs表达表面标记CD44和CD90阳性率高,可通过诱导向成骨细胞分化,具有多向分化潜能,所培养的细胞可用于细胞移植。第三部分甘露醇对骨髓间充质干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠行为学与海马胆碱能系统的影响【目的】观察甘露醇对骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗血管性痴呆(VD)大鼠行为学及海马胆碱能系统活性的影响【方法】将经Morris水迷宫实验鉴定为痴呆模型的32只大鼠,随机分为三组:①甘露醇预处理BMSCs组(12只),甘露醇预处理后,尾静脉注射移植BMSCs;②BMSCs组(12只),尾静脉注射移植BMSCs;③培养基组(8只),尾静脉注射等量BMSCs基础培养基;还设假手术组(7只),暴露双侧颈总动脉但不结扎,不进行任何干预。BMSCs移植4周后进行Morris水迷宫试验和大鼠海马内乙酰胆碱酯酶(AChE)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性检测。【结果】BMSCs组大鼠移植BMSCs后,其AChE和ChAT活性均比培养基组有明显提高(P<0.05),同时其行为学亦较培养基组有明显改善(P<0.05)。甘露醇预处理BMSCs组的AChE和ChAT活性均比BMSCs组、培养基组有更明显提高(P<0.05),同时其行为学亦较BMSCs组、培养基组有更明显改善(P<0.05)。【结论】BMSCs组大鼠移植BMSCs后其AChE和ChAT活性均比培养基组有明显提高,同时其行为学亦较培养基组有明显改善,提示BMSCs能提高胆碱能系统活性与改善大鼠学习与记忆功能。甘露醇预处理后再静脉移植BMSCs使VD大鼠海马胆碱能系统的活性得到更明显增强,并进一步改善VD大鼠的学习与记忆能力,提示可能与甘露醇可逆性打开血脑屏障,促使更多BMSCs进入脑内有关。