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目的:观察短刺加电针法对兔膝骨关节炎的疗效,探索短刺加电针治疗兔膝骨关节炎的软骨细胞作用机制。方法:40只新西兰兔随机分为正常组(N组)10只、造模组30只,对造模组行Hulth-Telhag手术法复制膝骨关节炎模型,X线评估造模情况,造模成功后随机分为模型组(M组)、短刺组(CN组)和普通针刺组(NTN组)。术后6周开始治疗,M组不予任何处理,CN和NTN组取足三里、内外膝眼、梁丘和阴陵泉穴,CN组采用贴骨深刺的短刺加电针法,NTN组采用普通针刺加电针法,留针20min,每天1次,每个疗程5天,共治疗4个疗程。实验结束后采用HE染色观察软骨细胞的组织学改变,甲苯胺蓝染色观察软骨细胞形态,分别在治疗前和治疗结束后观察各组新西兰兔的行为学改变;免疫组化检测Runx2和ColⅩ蛋白的表达;Western-Blot法检测Runx2、Sox9和ColⅩ蛋白的表达;RT-PCR检测Sox9 mRNA的表达。结果:Lequesne MG评分、染色、Mankin评分、免疫组化、WB及RT-PCR结果一致。(1)行为学评分:N组Lequesne MG评分在0~1分,行为学正常,与N相比,治疗前M、CN、和NTN组Lequesne MG评分显著增高,有统计学差异(P<0.01),M、CN、NTN组在治疗前Lequesne MG评分比较差异无统计学差异(P>0.01),治疗结束后,与M组相比,CN和NTN组评分显著降低,其中CN组降低更加明显,有统计学差异(P<0.01);(2)染色观察及Mankin评分:N组软骨表面光滑、软骨细胞分布均匀、排列整齐、甲苯胺蓝染色均匀无失染、潮线完整;M组软骨表层有裂隙、软骨细胞层次不清晰、排列无序、有成簇细胞出现、甲苯胺蓝染色深染、潮线不完整;CN组软骨表面不规则、软骨细胞数量较少、排列稍紊乱、轻度失染、潮线较完整;NTN组软骨表面粗糙、软骨细胞排列紊乱、出现成簇细胞、轻度失染、潮线不完整。CN组和NTN组与M组相比软骨细胞分布较均匀,软骨缺损程度减轻;CN组与NTN组相比细胞染色更均匀、细胞排列更整齐、层次清晰。Mankin评分显示:N组Mankin评分0~1分,M组Mankin评分7~9分,CN组Mankin评分3~5分,NTN组Mankin评分4~6分,四组评分有显著差异(P<0.01)。(3)免疫组化和Western-Blot(WB)检测:与M组比较,N、CN、NTN组Runx2和ColⅩ蛋白表达量显著降低,比较差异有统计学意义(P<0.01);CN组较NTN组显著降低,两组比较有差异(P<0.01),说明短刺加电针法能有效下调Runx2和ColⅩ蛋白表达,且效果优于普通针刺组。(4)RT-PCR检测:与N组比较,M组、CN组和NTN组Sox9 mRNA表达量明显降低(P<0.01);与M组比较,CN组和NTN组Sox9 mRNA表达量明显升高(P<0.01);且CN组Sox9 mRNA表达量明显高于NTN组(P<0.01)。结论:短刺加电针法较普通针刺法更能有效地治疗KOA,短刺加电针法能上调Sox9和下调Runx2、ColⅩ的表达,从而抑制兔膝骨关节软骨细胞肥大分化,这可能是其治疗KOA的机制之一。