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第一部分慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+T细胞Runx3的表达目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+T细胞Runx3mRNA的表达及意义。方法选取37例慢性乙型肝炎患者和19例健康对照者，应用密度梯度离心法分离外周血CD4~+T细胞，应用实时定量PCR检测CD4~+T细胞Runx3mRNA的表达水平。结果慢性乙型肝炎组Runx3mRNA的表达水平（0.48±0.09）较健康对照组（0.79±0.17）明显降低（P<0.01）。结论Runx3基因可能参与了慢性乙型肝炎的发病过程。第二部分人Runx3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定目的构建人Runx3基因重组慢病毒载体。方法PCR扩增人Runx3基因，应用In-Fusion技术将Runx3基因PCR扩增产物交换进入线性化慢病毒载体pGC-FU以构建重组慢病毒质粒pGC-FU-Runx3，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。对长出的阳性克隆进行PCR鉴定，并进行测序和比对分析。将构建成功的重组慢病毒质粒pGC-FU-Runx3与包装质粒pHelper1.0、包膜质粒pHelper2.0共转染293T细胞进行病毒包装。荧光显微镜下观察重组慢病毒质粒pGC-FU-Runx3转染293T细胞后细胞内绿色荧光表达情况。Western blot检测Runx3与EGFP融合蛋白表达情况。实时定量PCR测定病毒滴度。结果重组慢病毒质粒pGC-FU-Runx3经测序和比对分析证实目的基因序列正确。三质粒共转染293T细胞后荧光显微镜下观察细胞内可见明显的绿色荧光。Western blot证实Runx3与EGFP融合蛋白在293T细胞内稳定表达。浓缩病毒后测定滴度为2.0×10~8TU/ml。结论成功构建携带人Runx3基因的重组慢病毒载体pGC-FU-Runx3。第三部分Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞分化的影响目的探讨Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞分化的影响。方法重组慢病毒载体pGC-FU-Runx3与阴性对照慢病毒载体pGC-FU分别转染29例慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+T细胞，收集培养3d、5d和7d的细胞培养液上清，应用ELISA检测Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2和Th2型细胞因子IL-4、IL-10的表达水平。收集培养5d的CD4~+T细胞，应用实时定量PCR检测转录因子T-bet、GATA3mRNA的表达水平。结果1.与pGC-FU转染组比较，pGC-FU-Runx3转染组Th1型细胞因子IFN-γ的表达水平在3d（P<0.05）、5d（P<0.01）和7d（P<0.01）时均明显升高；IL-2的表达水平在3d时无显著性差异（P>0.05），但在5d（P<0.05）和7d（P<0.01）时均明显升高。2.与pGC-FU转染组比较，pGC-FU-Runx3转染组Th2型细胞因子IL-4的表达水平在3d时无显著性差异（P>0.05），但在5d（P<0.01）和7d（P<0.05）时均明显降低；IL-10的表达水平在3d时无显著性差异（P>0.05），但在5d和7d时均明显降低（P均<0.05）。3.与pGC-FU转染组比较，pGC-FU-Runx3转染组IFN-γ/IL-4比值在3d、5d和7d时均明显增大（P均<0.01）。4.与pGC-FU转染组比较，pGC-FU-Runx3转染组T-bet、GATA3mRNA的表达水平无显著性差异（P>0.05），但pGC-FU-Runx3转染组T-bet/GATA3比值较pGC-FU转染组明显增大（P<0.01）。结论Runx3基因过表达可促进慢性乙型肝炎患者Th1型细胞因子的分泌，抑制Th2型细胞因子的分泌，促使慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞向Th1细胞分化，使其Th1/Th2失平衡得到改善。