聚乙二醇-聚己内酯共聚物胶束的细胞内在化作用研究

来源 :西南交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jp19861213
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近年来,两亲性嵌段共聚物胶束作为一种新兴的纳米药物载体,逐渐成为药物传递体系(DDS)的研究热点。但是,关于胶束进入细胞的具体机理的研究尚不充分。由于两亲性是形成嵌段共聚物胶束的先决条件,很有必要考察亲疏水比例对细胞内在化的影响。基于上述研究目的,本论文对聚醚-聚酯共聚物胶束的内在化行为进行了研究。首先,利用聚乙二醇单甲醚(mPEG)和ε-己内酯(1ε-CL)单体成功合成了四种不同亲疏水比例的两亲性聚醚-聚酯嵌段共聚物,并成功在末端接枝上了荧光探针异硫氰酸荧光素(FITC)。通过傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、核磁共振氢谱(1H-NMR)、凝胶渗透色谱(GPC)、X射线衍射(XRD)和临界胶束浓度(CMC)的检测结果可知,合成的嵌段共聚物具备了预期的化学结构和性质。更重要的是,接枝上FITC后并没有对嵌段共聚物的成胶束的能力产生影响。其次,利用溶剂挥发法制备了四种不同亲疏水比例的嵌段共聚物胶束及对应的荧光标记的共聚物胶束。接着用纳米激光粒度仪(DLS)、原子力显微镜(AFM)和酶标仪等实验仪器对胶束的粒径、Zeta电位、形貌、稳定性及体外毒性等性质进行了表征,结果表明不同亲疏水比例的胶束具有相同的球形形貌,十分相似的粒径和Zeta电位,以及良好的稳定性和生物相容性。然后,选用NIH-3T3成纤维细胞对胶束的内在化能力进行了考察。由荧光显微镜和Image Pro Plus6.0软件得到的半定量的结果证明,在3个小时的培养时间内,荧光标记的胶束具有与FITC相当的荧光强度,从而说明化学接枝并不会影响FITC的荧光性能,而且胶束具备良好的内在化能力。最后,重点考察了胶束通过内吞作用进入人脐静脉内皮细胞(HUVEC)或肝癌细胞(HepG2)的具体内在化方式。利用荧光显微镜和Image Pro Plus6.0软件进行了半定量分析,此外,利用流式细胞仪进行了定量分析。结果显示,亲水比例高的胶束更容易进入细胞;在HUVEC细胞中,细胞膜穴样内陷介导的内吞和大胞饮作用表现出明显的亲疏水比例依赖性;在HepG2细胞中,胶束主要通过网格蛋白介导的内吞和大胞饮作用进入细胞,当亲水比例较低时,大胞饮作用是主要的内在化方式,当亲水比例较高时,网格蛋白介导的内吞成为主要方式。
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