论文部分内容阅读
目的:
子宫内膜癌是女性生殖道最常见的三大恶性肿瘤之一,近年随着全球妇女人均寿命的延长等因素,其发生率已呈上升趋势。如何更加深入地研究子宫内膜癌发病过程及机制、探索新的治疗子宫内膜癌的方法,成为当前子宫内膜癌研究的主要方向。本研究通过RT.PCR的方法检测子宫内膜癌冰冻标本中NRG-1和Cyr61基因的表达情况,来分析探讨二者在子宫内膜癌发生发展中的意义,同时推测他们与子宫内膜癌临床病理的联系。
材料与方法:
一、临床材料
选取中国医科大学1998年6月~2006年7月妇产科收治的子宫内膜样腺癌36例(内膜癌组),子宫内膜非典型增生12例(非典型增生组),选取同期宫腔镜手术获得的正常增殖期子宫内膜组织10例(对照组),36例子宫内膜癌按1988年国际妇产科联盟(FIGO)分期标准进行手术病理分期。所有患者术前均未接受放射治疗、化学药物治疗或激素治疗,且不合并其它肿瘤。
二、主要试剂
RNA提取试剂盒(美国Trizol Invetrogen公司);RT-PCR反应试剂盒(大连宝生生物公司)。
三、实验方法
RT-PCR:冰冻组织标本,Trizol总RNA提取液提取总RNA,紫外分光光度测定OD260/280,估计RNA纯度。反转录mRNA,扩增cDNA。琼脂糖凝胶电泳,EB染色,紫外灯下观察结果并拍照。Cyr61、NRG-1均以PBS代替逆转录酶作为阴性对照。
四、结果判定
用ID Kodak成像分析系统对扩增产物条带进行扫描分析。Cyr61及NRG-1基因的表达量通过同时扩增β-actin的表达进行校正,以分别的光密度比值作为基因在正常子宫内膜、非典型增生内膜及相应的子宫内膜癌组织表达量。
五、统计
实验数据用X±s表示,采用NSPSS11.5软件进行单因素方差分析、独立样本的T检验及相关分析。
结果:
一、Cyr61的表达RT-PCR结果显示正常子宫内膜中Cyr61基因的表达水平高于非典型增生内膜和子宫内膜癌组织,前者光密度比值为0.9136±0.02803,后两者分别为0.6997±0.02159,0.3950±0.9656,三者比较有显著性差异(F=199.440,P<0.001)。Cyr61基因mRNA表达量与手术病理分期及病理分级有关(P<0.01),与肌层浸润深度无关(F=0.115,P=0.909)。
二、NRG-1的表达RT-PCR结果显示正常子宫内膜中NRG-1基因的表达水平高于非典型增生内膜和子宫内膜癌组织,前者光密度比值为0.8264±0.04284,后两者分别为0.6564±0.02817,0.3290±0.12438,三者比较有显著性差异(F=116.158,P<0.001)。NRG-1基因表达量与手术病理分期及病理分级有关(P<0.001),与肌层浸润深度无关(F=1.698,P=0.099)。
三、Cyr61与NRG-1的关系实验结果显示,NRG-1与Cyr61基因的表达存在显著正相关性(r=0.910.P<0.01)。
结论:
1、Cyr61基因在子宫内膜癌组织中表达减弱,且临床期别晚、组织学分级差Cyr61表达水平低,提示Cyr61可能作为子宫内膜癌的生长负调节因子,在子宫内膜癌的发展、恶化中起一定作用。
2、NRG-1基因mRNA在子宫内膜癌组织中表达减弱,且表达量随其病理分级的升高、手术病理分期的进展而降低,推测NRG-1同样是子宫内膜癌细胞生长负调节因子,其表达的减弱或缺失是子宫内膜癌发展及恶化的有利条件。
3、子宫内膜癌中NRG-1与Cyr61基因的表达存在正相关性。推测Cyr61可能作为NRG-1的下游效应器发挥作用。