细菌素作为一种天然生物防腐剂，用于食品防腐以提高食品安全性和延长食品货架期。为解决天然菌株细菌素产量较低的问题，本课题采用基因工程技术，克隆乳酸片球菌的片球菌素pedA基因，建立大肠杆菌片球菌素基因pedA表达系统，以期获得片球菌素的高效表达。以乳酸片球菌基因组为模板，采用PCR法，扩增出了片球菌素的结构基因pedA。将扩增的pedA基因连接到pMD18-T载体，转化至大肠杆菌DH5α。提取含有pedA基因的pMD18-T重组质粒，Bgl II和Xhol I双酶切获得pedA基因，与经同样双酶切后的表达质粒pET32a(+)连接，先后转化至大肠杆菌DH5α和大肠杆菌BL21(DE3)，用PCR法筛选阳性克隆菌株后，选取其中的一株阳性克隆菌株，提取重组质粒，进行pedA基因测序，发现该重组质粒含有pedA基因，其核苷酸序列与NCBI公布的片球菌素pedA基因（GenBank AY083244）同源性为100%。该菌株在含有1mmol/L IPTG的培养基中，37℃培养4小时后，高效表达了预期大小的22kDa硫氧还蛋白和片球菌素的融合蛋白。重组菌培养物经超声破碎后离心，分别取上清和沉淀物用SDS-PAGE进行分析，由于在沉淀物SDS-PAGE电泳结果中有预期大小的融合蛋白条带，表明表达的蛋白为包涵体。为获得有活性的表达产物，将提取的包涵体充分洗涤，用含有谷胱甘肽氧化还原系统的复性缓冲液处理，促进蛋白正确折叠复性。由于表达的融合蛋白含有His-tag，复性后的蛋白质通过Ni-IDA亲和重力柱分离纯化，在500mmol/L咪唑浓度下洗脱得到单一蛋白条带，纯化的蛋白浓度在0.4-0.7mg/mL。纯化的蛋白质经肠激酶酶切后，SDS-PAGE电泳出现两个蛋白条带，其中一个与片球菌素分子量相近，另一个与硫氧还蛋白的分子量相近。纯化的蛋白质经肠激酶酶切后，牛津杯法测定酶切产物的抑菌活性，发现对单核细胞增多症李氏杆菌具有抑制作用，表明本试验建立的pedA基因大肠杆菌表达系统可以表达片球菌素融合蛋白，经包涵体复性、融合蛋白酶切后得到了有活性的片球菌素产物。对得到的基因工程片球菌素，用牛津杯法测定其抑菌谱，除对单核细胞增多症李氏杆菌有抑菌作用外，对植物乳杆菌也有抑制作用，但对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157无抑制作用。