具核梭杆菌中丝氨酸肽酶的表达、纯化和结晶

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具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,F.nucleatum)是一种专性厌氧菌,同时也是引起牙周炎的主要致病菌之一。除牙周炎外,它还可以引起心包炎、脑脓肿和结直肠癌等全身疾病。具核梭杆菌主要从多肽和氨基酸的发酵中获得能量,目前关于具核梭杆菌能量代谢的研究却很少,我们在具核梭杆菌中发现一个BKN39_05345的丝氨酸肽酶。为了解析BKN39_05345蛋白的结构,探索其功能,本实验全基因合成了BKN39_05345的基因,并成功构建了重组表达载体。对BKN39_05345蛋白经过一系列的表达、纯化的优化后,我们得到了可以用于蛋白结晶的均一的目的蛋白。通过蛋白结晶初筛、优化后,我们在6个条件获得形状较好的晶体,在21%PEG_2000、0.1 M Tris p H 7.9条件下收集到的X射线衍射数据为2.7?,可以用于结构的解析。BKN39_05345蛋白具有丝氨酸肽酶的序列特征,酶活实验结果证实,BKN39_05345蛋白具有肽酶活性,并且我们发现其在溶液中表现为四聚体形式。这些结果为后续的蛋白结构解析和蛋白酶活性的进一步研究尊定了基础。
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