亮氨酰-tRNA合成酶结构与功能的研究

来源 :中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:f6012000
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成功构建了带有T7启动子的His<,6>-标签表达质粒-pMFTTH<,6>.一些氨基酰-tRNA合成酶(aaRS)对氨基酸的识别是通过两个步骤来完成的:一、比对应氨工酸大的氨基酸被"粗筛"选择性地阻止于酶的催化活性中心之处;二、一些可以被错误识别而形成的中间体或产物被"细筛"水解.这个编校机制被称为"双筛"机制.在对大肠杆菌LerRS编校机制的研究中,构建了CP1结构域Met328至Pro368的肽段重复变种酶-LeuRS-B.结果表明大肠杆菌LeuRS的CP1结构域是"细筛"的结构基础;而且CP1结构域要置于酶的前后序列中才能行使其编校功能.为了研究大肠杆菌LeuRSCP1结构域中292-293位肽键的功能,构建了肽键附近的一些点突变.成功的克隆,表达并纯化了AquifexaeolicusLueRS及其tRNA,并对该酶的动力学和其它特性进行了研究.测这了该酶的动力学常数,并对大肠杆菌和Qquifexaeolicus的LeuRS及tRNA的交叉识别进行了研究.为了分泌表达GL-7-ACA酰化酶,利用来自假单胞菌的GL-7-ACA酰化酶的信号肽和表达元件基因片段克建了GL-7-ACA酰化酶的分泌表达质粒pTrcCA1S和pKKCA1S.
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