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[研究目的]EGCG是绿茶茶叶中含量最多、活性最高的儿茶素,也是研究最广泛最深入的茶多酚类物质。目前对EGCG的体外研究认为,EGCG能够诱导肿瘤细胞发生凋亡。但问题在于细胞培养体系中EGCG引起细胞死亡的有效浓度通常需要达到200μM,甚至更高,而由于EGCG的吸收限制和代谢迅速,实际情况很难达到如此高的血药浓度。因此,如何在保证EGCG细胞毒性的同时降低其有效浓度是-个亟待解决的问题。我们的研究发现,剥夺培养体系中的血清成分能显著增加低剂量情况下EGCG的细胞毒性。为此,我们希望能进一步探究无血清条件造成EGCG细胞毒性增强的分子机制。[研究方法]1.细胞培养：细胞分别在完全或无血清培养液中预处理1小时,随后加入EGCG处理不同时间；2. Hoechst-PI双染检测细胞存活率：hoechst标记总细胞,PI标记死细胞,利用软件Image J计数细胞；3. Western blotting实验：提取细胞总蛋白或利用digitonin分离包浆蛋白,检测不同蛋白在细胞内的表达；4.细胞染色：吖啶橙染色,油红O染色,Lyso-Tracker Red探针标记,ROS探针标记,magic red标记；5.免疫荧光染色：溶酶体膜蛋白LAMP-1及内质网膜蛋白Bip染色。[研究结果]1.剥夺培养体系中的血清成分能显著增加低剂量情况下EGCG的细胞毒性。并且在无血清体系中,EGCG引起的细胞死亡是一种以胞浆空泡化为主要特征,且有别于凋亡的caspase非依赖性细胞死亡形式。2.在这一过程中虽然能够观察到自噬体的显著增加,但最后的细胞死亡却是自噬非依赖的。事实上,EGCG在无血清体系中引起溶酶体膜通透(LMP),导致胞浆酸化及溶酶体内蛋白酶向胞浆渗漏,是引发细胞死亡的主要原因。而溶酶体损伤引起溶酶体本身pH升高、蛋白酶活性下降,使溶酶体丧失降解功能才是导致自噬体堆积的直接原因。3.胞浆空泡是由于溶酶体胀大所产生的。4.溶酶体膜之所以发生损伤可能是EGCG在无血清体系中诱导大量ROS形成所造成的。[研究结论]血清剥夺造成EGCG的细胞毒性增强与ROS介导的溶酶体不稳定密切相关。