副溶血弧菌是一种革兰氏阴性嗜盐菌,广泛分布于江河口、海洋环境以及多种水产品中,食用副溶血弧菌污染的食物后会引起腹泻、呕吐、发热等症状,重症患者还有可能出现脱水、休克昏迷,甚至死亡。尤其在一些沿海城市,由副溶血弧菌引起的食物中毒事件占食源性致病菌引起中毒总数的60%以上。因此,建立快速、准确的副溶血弧菌检测方法对该菌防控起到重要作用。等温多自配引发扩增（Isothermal multiple self-matching-initiated amplification,IMSA）技术是2013年由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所自主发明的一种新型的等温核酸扩增技术,IMSA技术无需昂贵的热循环仪器,在等温条件和Bst聚合酶的作用下就能实现对特定核苷酸片段的快速扩增。有文献指出该方法已用于埃博拉病毒扎伊尔亚型、大肠杆菌Ⅱ型热不稳定肠毒素、大肠杆菌O157:H7型和人肠道病毒71型、柯萨奇病毒16型、沙门氏菌等的检测,结果证明在检测限方面IMSA方法优于LAMP方法。本论文的主要研究内容为应用IMSA技术,利用副溶血弧菌特异性基因,即不耐热溶血毒素基因（tlh）,设计6条特异性引物（四条混合式引物Ds F、Ds R、FIT、RIT和两条非混合式引物Ste F和Ste R）进行恒温扩增,并对反应条件进行优化。加入热稳定无机焦磷酸酶,使扩增时产生的焦磷酸根离子（PPi）分解成磷酸根（Pi）,Pi在酸性条件下与钼酸铵反应生成磷钼杂多酸,再和孔雀石绿碱性染料结合生成绿色离子缔合物,同时以聚乙烯醇稳定显色液,从而达到可视化效果,建立一种特异性强和灵敏度高的可视化副溶血弧菌检测方法。研究结果如下:1.IMSA检测副溶血弧菌最佳反应体系为1×等温扩增缓冲液、0.5×SYBR GreenⅠ、0.6 mol·L-1甜菜碱、5 mmol·L-1 Mg SO4、0.8 mmol·L-1 d NTPs、0.2μmol·L-1 Ds F/Ds R、0.8μmol·L-1 FIT/RIT、1.6μmol·L-1 Ste F/Ste R、8U Bst 2.0 DNA聚合酶、2μL DNA模板;最佳反应温度为62℃;最佳反应时间为1 h。2.可视化IMSA检测副溶血弧菌的最佳反应体系为1×等温扩增缓冲液、0.4mol·L-1甜菜碱、4 mmol·L-1 Mg SO4、0.6 mmol·L-1 d NTPs、0.2μmol·L-1 Ds F/Ds R、0.8μmol·L-1 FIT/RIT、1.6μmol·L-1 Ste F/Ste R、10 U Bst 2.0 DNA聚合酶、2μL DNA模板、0.1 U热稳定无机焦磷酸酶;最佳显色试剂组成为0.02%聚乙烯醇、24 mmol·L-1钼酸铵、0.5 mol·L-1浓硫酸、0.5 mmol·L-1孔雀石绿溶液;最佳反应温度为62℃;反应时间为40min。3.IMSA及可视化IMSA检测方法检测副溶血弧菌的检测限是10~3 copies。4.可视化IMSA检测方法对产物中磷酸根检测与使用磷酸试纸条相比,灵敏度较高。