【摘 要】
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目的探讨补阳还五汤在MSCs向神经细胞体外定向诱导分化过程中的作用，为MSCs在神经内科学领域的研究和应用奠定实验基础。方法取成年健康SD大鼠股骨和胫骨骨髓，密度梯度离心法分离获取骨髓单个核细胞(mononuclear cells，MNCs)。多次洗涤后，将细胞沉淀接种于含10％胎牛血清(FBS)的低糖DMEM(L-DMEM)培养液中，置于37℃、5％CO、饱和湿度的CO培养箱中培养，细胞融合后用
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目的
探讨补阳还五汤在MSCs向神经细胞体外定向诱导分化过程中的作用，为MSCs在神经内科学领域的研究和应用奠定实验基础。
方法
取成年健康SD大鼠股骨和胫骨骨髓，密度梯度离心法分离获取骨髓单个核细胞(mononuclear cells，MNCs)。多次洗涤后，将细胞沉淀接种于含10％胎牛血清(FBS)的低糖DMEM(L-DMEM)培养液中，置于37℃、5％CO<,2>、饱和湿度的CO<,2>培养箱中培养，细胞融合后用0.25％胰酶消化传代。培养3～6代的细胞接种于塑料培养皿中，待细胞铺满80％培养皿时，采用碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)培养24 h，以促进细胞的增殖。然后实验组细胞应用补阳还五汤对大鼠MSCs(rMSCs)进行体外定向诱导分化；对照组细胞不加任何诱导剂。应用免疫细胞化学方法检测诱导1h、3h后神经干细胞标记物一巢蛋白(nestin)的表达，以及诱导5 h后神经元标记物一神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)和星形胶质细胞标记物-胶质细胞纤维酸性蛋白(glail fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，分别计数各种分化细胞的阳性率。
结果
1. 分离后的大鼠骨髓MSCs(rMSCs)在体外培养条件下，呈增殖性生长。传代后的rMSCs约3天左右可扩增一倍。
2.MSCs经诱导1 h后，即有部分细胞呈现神经元样形态，诱导5 h结束时，大部分细胞具有典型神经元样形态：较多的神经元样细胞聚集在一起，相邻细胞间的轴突联结成网状。
3. 对照组MSCs仅表达少量nestin和NSE，阳性率分别为1.6％±0.8％和5.8％±2.6％。实验组MSCs诱导1h、3h后nestin阳性率分别为40.5％±2.3％和29.0％±3.4％，nestin的表达呈现先上升后下降的趋势(P<0.05)；实验组诱导5h后NSE的阳性率为86.8％±2.7％，与对照组差异有显著性(P<0.05)；GFAP的阳性率为8.9％±1.8％。
结论
1.成年MSCs可以在体外培养扩增；
2.MSCs经体外定向诱导后，可以分化为神经元样细胞3.补阳还五汤对MSCs分化为神经元样细胞具有促进作用
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