目的：采用自制抗原抗体等关键原料，建立人附睾蛋白4（Humanepididymis protein4，HE4）的全自动化学发光定量检测方法，并进行系统的性能评价和方法学比对。方法：1.采用蛋白A柱亲和纯化腹水中抗HE4单克隆抗体，并进行电泳鉴定抗体纯度；2.分别标记生物素和辣根过氧化物酶抗HE4单克隆抗体用，并摸索最佳标记比例；3.将生物素化抗体包被在链亲和素磁珠上，并摸索最佳包被量；4.将抗体进行交叉配对，筛选出效价最高、配对效果最佳的一对抗体；5.参考EP17-A方法，通过对系列梯度低浓度样本的反复测定，确定本方法的空白限（LOB）、检出限（LOD）、定量检出限（LOQ）；6.通过用本方法测定医学决定水平上限的其他常见肿瘤标志物（AFP、CEA、CA199、CA125、CA153），鉴定本方法是否存在明显交叉反应；7.通过在样本中添加不同浓度的胆红素、血红蛋白、乳糜微粒、维生素H（生物素）等常见样本干扰，鉴定本方法是否对样本质量和类型具有限制性；8.在临床样本中添加一定浓度的HE4重组抗原，用本方法进行测定，并计算添加回收率，鉴定本方法的检测准确度；9.通过对检测上限的临床样本进行等比例稀释成梯度样本，用本法进行测定，并计算测定浓度与稀释比例的相关性，验证本方法的检测范围；10.通过用本方法对高、中、低值样本进行多批次、长时间的重复测定，鉴定本方法的重复性和期间精密性性能；11.将本方法的试剂组分分别保存在4℃和37℃，观察37℃保存的热破坏稳定性；12.采用本方法（CLIA）、Fujirebio（ELISA）测定临床样本，进行一致性与相关性分析。结果：1.通过蛋白A柱纯化后的9株单克隆抗体经鉴定，纯度均可达95%以上，可满足后续试验需求；2.对比不同抗体/生物素标记比例（1/10、1/20、1/40），结果显示随着生物素用量增加，抗体活性有明显下降趋势，初步确定以1/10作为抗体标记生物素比例进行后续试验；3.对比不同抗体/HRP标记比例（1/2、1/4、1/6），结果显示在1/4标记时抗体活性最高，因此确定以1/4作为抗体标记HRP比例进行后续试验；4.经交叉配对实验，3#抗体无论最为固相抗体还是HRP标记抗体，活性均满足要求。5.我们选择以1#抗体作为固相，与3#标记抗体配对，测定部分临床样本，结果显示无明显反应信号，提示抗体无法特异的与样本中HE4抗原反应。将1#更换为四川迈克提供的H6单克隆抗体后，测定临床样本结果与对照方法（Fujirebio）相关性良好；6.通过性能参数评价，本方法LOB为1.014pmol/L，LOD为5.252pmol/L，LOQ为10.568pmol/L；对高浓度AFP、CEA、CA199、CA125无明显交叉反应；胆红素、血红蛋白、乳糜微粒、维生素H对本方法无明显干扰；添加回收率为；线性范围为20~1700pmol/L；重复性为1.5%-3.6%，期间精密性为3.8%-6.4%；热破坏后相对偏差为-0.94%～8.34%；7.与Fujirebio比对相关性良好， y=1.023x-12.280，r=0.9897（P<0.001）。结论：1.通过抗体纯化、鉴定、标记、配对试验、优化等一系列调整后，本方法已经具备测定临床样本中HE4抗原的能力。2.通过系统的性能评价和方法学比对，本方法具备定量检测临床样本中HE4抗原浓度的能力，可作于卵巢癌早期诊断的有效辅助工具。