论文部分内容阅读
目的（1）总结中西医对狼疮性肾炎（LN）的发病机制和防治措施的研究进展；（2）观察清热解毒活血中药对瘀热痹阻证LN的临床疗效。（3）观察Ⅳ型LN患者血清对正常人肾小球系膜细胞（GMC）增殖的影响以及清热解毒活血中药对Ⅳ型LN血清干预下GMC增殖、细胞凋亡、GMC中Bcl-2蛋白合成和Bcl-2mRNA表达的影响，从细胞分子生物学水平探讨清热解毒活血中药治疗LN的机制，为临床应用提供实验依据。方法（1）文献研究：通过查阅大量古代和现代中、西医国内外文献，总结和评价有关LN的中医认识、病因病机、西医发病机制以及中西医防治措施方面的研究现状。（2）临床研究：用简单随机化、前瞻性的研究方法，将60例瘀热痹阻证LN患者按1：1比例分为对照组和治疗组。对照组采用常规西医治疗，治疗组在对照组的基础上加用清热解毒活血中药治疗，3月为一疗程。观察患者主要症状、证候（面部红斑、发热、口疮、双手红斑、关节疼痛、关节肿胀、肌肉疼痛、脱发、浮肿、胸痛、心悸、乏力、烦躁、手足心热、口干、失眠、耳鸣、痤疮、咽痛、月经血块）和实验室检查指标(白细胞、淋巴细胞、血红蛋白、血小板、尿白细胞、尿红细胞、尿蛋白、尿素氮、肌酐、血浆白蛋白、血沉、C3、C4、CH50、抗核抗体、抗双链DNA抗体（抗ds-DNA抗体）、凝血功能等)的改善情况，计算治疗前后的狼疮活动评分（SLEDAI）和中医证候积分，评定疾病疗效和证候疗效。（3）实验研究：①将正常对照血清和不同浓度（5％、10％、15％、20％）的Ⅳ型LN患者的血清作用于GMC，观察其对GMC增殖的影响，并选择对GMC增殖影响最显著的一组血清（x％）用于下一步的实验。②结合血清药理学方法，分为5组进行观察（Ⅰ组为空白对照组、Ⅱ组为对照组血清+x％LN血清组、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分别为低、中、高浓度含药血清+x％LN血清组），分别采用MTT法检测GMC的增殖及抑制率，荧光法和流式细胞仪技术检测GMC细胞凋亡。③再将实验分为5组进行，1组为空白对照组、2组为对照组血清+x％LN血清组、3、4、5组分别为低、中、高浓度含药血清+x％LN血清组，采用western blot检测GMC中抑凋亡基因Bcl-2蛋白的合成、采用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）测定Bcl-2mRNA的表达。结果（1）文献研究：①病名：根据狼疮性肾炎的临床表现可归属于中医“阴阳毒”、“红蝴蝶疮”、“阳毒发斑”、“痹证”、“水肿”、“虚劳（肾劳）”等范畴。②病因病机：肝肾阴虚、热毒血瘀为瘀热痹阻证LN的病机特点。③治疗：主要分为分型论治、分期论治、中成药治疗、自拟方治疗、单味药或中药提取物治疗、中药注射液治疗及其它疗法，取得较好的疗效，目前多数学者采用清热解毒活血法为主治疗LN。④现代医学研究：LN发病复杂，与遗传因素（遗传易感因素等）、GMC增殖及凋亡异常、免疫调节功能异常（细胞因子网络失衡、自身抗体如抗ds-DNA抗体、抗心磷脂抗体等的产生和免疫复合物清除能力下降等）以及神经、内分泌、代谢因素等有关，其中，肾小球固有细胞如GMC增殖、凋亡异常是LN发生、发展的重要机制，因此，防治措施力图抑制肾小球固有细胞如GMC的增殖、诱导细胞凋亡。治疗上有糖皮质激素、免疫抑制剂、其它疗法（血浆置换、免疫吸咐疗法、免疫球蛋白）等，但西医治疗存在着治疗方案不规范、部分患者对治疗不敏感或产生耐药、副作用大等缺点，因此，研究疗效确切、经济、副作用较小的中医药治疗方案成为当前临床研究的重点。（2）临床研究：治疗组疾病疗效评定总有效率和证候疗效评定总有效率分别为83.33％、93.33％，疾病疗效高于对照组，差异无统计学意义（P＞0.05），证候疗效明显高于对照组，差异有非常显著性意义（P＜0.01）。治疗组治疗后SLEDAI和中医证候积分较治疗前均明显减少，差异有非常显著性意义（P均＜0.01）；治疗组治疗后SLEDAI的降低优于对照组，但无统计学意义（P＞0.05），中医证候积分较对照组明显降低，差异有非常显著性意义（P＜0.01）。二组患者的LN主症较治疗前均可明显减轻，差异有非常显著性意义（P均＜0.01），且治疗组治疗后LN主症的改善作用优于对照组，但差异无统计学意义（P＞0.05），与对照组相比患者的烦躁、咽痛、痤疮、月经血块、口干、手足心热、耳鸣、心悸症状也明显减轻，差异有非常显著性意义（P均＜0.01）。在实验室检查方面，治疗组患者治疗后白细胞、淋巴细胞、血红蛋白、血小板、血浆白蛋白、C3、C4、CH50明显升高，尿红细胞、尿蛋白、ANA滴度、血沉、血浆纤维蛋白原明显降低，抗ds-DNA抗体转阴的作用也较明显，与治疗前相比，差异均有非常显著性意义（P均＜0.01）；其中，在降低血沉、抗ds-DNA抗体转阴方面的作用优于对照组，差异有显著性意义（P＜0.05）。（3）实验研究：①Ⅳ型LN患者血清对GMC增殖的影响：发现不同浓度（5％、10％、15％、20％）的Ⅳ型LN血清均可明显促进GMC增殖，与对照血清相比有非常显著性差异（P＜0.01），其中以15％Ⅳ型LN患者血清最为显著。②观察清热解毒活血中药对GMC增殖和凋亡的影响：在15％Ⅳ型LN患者血清干预下，不同浓度（低、中、高浓度）的含药血清均可明显抑制GMC的增殖、诱导GMC的细胞凋亡，与对照组血清相比差异有非常显著性意义（P＜0.01），其作用呈较明显的量效关系，其中，以高浓度含药血清组的上述作用最为显著，与其余各组比较差异均有非常显著性意义（P均＜0.01）。③GMC中B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）蛋白合成、Bcl-2mRNA表达的检测：对照血清组的Bcl-2蛋白合成、Bcl-2mRNA的表达比空白对照组显著增强；而在15％Ⅳ型LN患者的血清干预下，不同浓度（低、中、高浓度）的清热解毒活血中药的含药血清与对照组血清相比均可明显抑制GMC中抑凋亡基因Bcl-2蛋白合成和Bcl-2mRNA的表达，其作用呈较明显的量效关系，其中，以高浓度含药血清组的上述作用最为显著。结论（1）LN的发病机制较为复杂，GMC增殖、细胞凋亡异常是LN发病的重要机制；西医治疗存在部分患者不敏感、副作用大等缺点，研究能抑制GMC增殖、诱导GMC细胞凋亡的中药具有广阔的研究的临床应用前景。（2）临床研究显示：清热解毒活血中药不仅可以显著改善瘀热痹阻证LN的主症，改善各项标示狼疮活动的实验室检查指标，而且可以明显减少SLEDAI和中医证候积分，对瘀热痹阻证LN有较好的治疗作用，副作用小。（3）实验研究发现：Ⅳ型LN患者血清可明显促进GMC的增殖，以15％Ⅳ型LN患者血清最为明显。而清热解毒活血中药的含药血清可明显抑制15％Ⅳ型LN患者血清干预下的GMC增殖、诱导GMC的细胞凋亡、抑制抑凋亡基因Bcl-2蛋白的合成、下调Bcl-2mRNA的表达，这可能是清热解毒活血中药治疗LN的分子机理，从而为临床广泛应用提供了实验和理论依据。